[發(fā)明專利]一種檢測牛奶中青霉素殘留量的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010109375.3
• 申請日: 2010-02-11
• 公開（公告）號: CN101776591A
• 公開（公告）日: 2010-07-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊亞玲;耿衛(wèi)東
• 申請（專利權(quán)）人: 云南健牛生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33;G01N21/64;G01N1/28;G01N1/44
• 代理公司: 云南協(xié)立專利事務(wù)所 53108
• 代理人: 謝嘉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食品安全檢測技術(shù)領(lǐng)域，涉及牛奶中殘留抗生素的檢測方 法，特別是涉及一種檢測牛奶中青霉素殘留量的方法。

背景技術(shù)

工業(yè)化奶牛養(yǎng)殖中，經(jīng)常使用抗生素治療牛乳腺炎和其他乳牛疾病，這 些抗生素不可避免地會轉(zhuǎn)移到最初幾天的牛乳中。牛乳中殘留的抗生素會對 乳制品品質(zhì)帶來嚴(yán)重的影響。世界糧農(nóng)組織(FAO)、世界衛(wèi)生組織(WHO)的食 品法對牛奶中抗生素最高殘留限量都有明確規(guī)定，歐盟亦對最大殘留量(MRL) 作了詳細(xì)的規(guī)定。我國農(nóng)業(yè)部2001年頒布實施了《無公害食品生鮮牛乳行 業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》，對新鮮牛乳的衛(wèi)生指標(biāo)明確了“抗生素不得檢出”。

青霉素，因其高效、低毒是目前獸醫(yī)學(xué)臨床上應(yīng)用最受青睞的藥物之一。 但青霉素對乳酸菌的抑制作用與其他抗生素相比又是最強烈的，而且青霉素 的熱穩(wěn)定性相當(dāng)好，超過任何一種其他常用抗生素，一般的加熱殺菌處理不 能將其完全破壞。牛奶生產(chǎn)中，如果使用含有青霉素殘留的生鮮乳生產(chǎn)巴氏 消毒奶和超高溫滅菌奶，產(chǎn)品中仍會有相當(dāng)量的青霉素殘留；同時牛奶中青 霉素殘留可能會導(dǎo)致人體的各種不良反應(yīng)，人體對青霉素類抗生素藥物的敏 感性下降，增加病原菌對藥物的耐藥性。

青霉素的檢測至今都是該領(lǐng)域的技術(shù)難點，原因是青霉素的水溶液不穩(wěn) 定，會產(chǎn)生降解，且結(jié)構(gòu)中不含活性基團氨基?，F(xiàn)有技術(shù)中，已應(yīng)用的青霉 素殘留技術(shù)有微生物檢測法如TTC法，理化檢測方法包括色譜法，以及免疫 分析法等。上述方法在檢測精密度等方面各有所長，有的靈敏度低、選擇性 差；有的操作過程步驟較為繁瑣，有的需購置昂貴儀器，但大都存在檢測耗 時長、成本高的缺點，給乳品加工企業(yè)造成諸多不便。中國發(fā)明專利20091 0041985.1(CN101633948)公開的“牛奶中β-內(nèi)酰胺類抗生素殘留試劑盒 檢測方法”涉及的是一種以微生物為原理的檢測方法，與本發(fā)明有本質(zhì)的不 同。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種操作簡便、成本低廉、 檢測結(jié)果準(zhǔn)確的牛奶中青霉素殘留量的檢測方法。

本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)。

一種檢測牛奶中青霉素殘留量的方法，包括以下步驟：

1、青霉素的降解及荷移復(fù)合物的形成：配制青霉素鈉濃度0.01～ 100mg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作無水乙醇液，用稀HCl調(diào)至pH?2±0.5或4±0.5，沸水 浴10～30min使其降解，得到降解產(chǎn)物青霉胺或青霉烯酸，兩種降解產(chǎn)物 再分別與濃度為1×10^-3～10×10^-3mol/L的苯醌類物質(zhì)在常溫下反應(yīng)5～ 10min，得到荷移復(fù)合物，備用；

2、測定波長的選擇：將步驟1得到的青霉胺荷移復(fù)合物在紫外分光光 度計下測定紫外最大吸收波長，或是將得到的青霉烯酸荷移復(fù)合物在熒光分 光光度計下測定熒光的激發(fā)和發(fā)射光譜；其中，所述的紫外吸收或是熒光的 激發(fā)發(fā)射波長的測定選擇范圍為200nm～600nm；

3、針對不同的荷移復(fù)合物分別計算吸收光強度與荷移復(fù)合物的線性范 圍、回收率、標(biāo)準(zhǔn)偏差、檢測限和工作曲線；

4、樣品前處理：將牛奶樣品與脫蛋白、脫脂肪沉淀劑混合均勻，在轉(zhuǎn) 速800～3000r/min條件下離心分離3～10min，取上清液備用；

5、樣品測定：取步驟4中的上清液，按照步驟1進(jìn)行降解、荷移反應(yīng)， 得到相應(yīng)的荷移復(fù)合物，再按照步驟2的要求測定紫外最大吸收波長或熒光 的激發(fā)和發(fā)射光譜，計算該荷移復(fù)合物的吸收度，代入步驟3所得的該類荷 移復(fù)合物的工作曲線中即可求得牛奶中青霉素的殘留量。

步驟(1)中以水、甲醇、乙醇、異丙醇或丙酮中的一種作為反應(yīng)介質(zhì)； 所述的苯醌類物質(zhì)為苯醌、甲氧基苯醌、四氯苯醌或四氰基對二次甲基苯醌 中的一種。

步驟(4)中所述的脫蛋白、脫脂肪沉淀劑選自酸性乙腈(pH2)、三氯乙 酸、鎢酸鈉、醋酸鈉或醋酸鉛中的一種。其中，使用酸性乙腈或三氯乙酸時 將其與牛奶等體積混合；使用鎢酸鈉、醋酸鈉或醋酸鉛時按牛奶重量的2～ 10％重量百分?jǐn)?shù)混合。

同現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點：