[發(fā)明專利]一種檢測牛奶中青霉素殘留量的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010109375.3
• 申請日: 2010-02-11
• 公開（公告）號: CN101776591A
• 公開（公告）日: 2010-07-14
• 發(fā)明（設計）人: 楊亞玲;耿衛(wèi)東
• 申請（專利權）人: 云南健牛生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33;G01N21/64;G01N1/28;G01N1/44
• 代理公司: 云南協(xié)立專利事務所 53108
• 代理人: 謝嘉

1.一種檢測牛奶中青霉素殘留量的方法，包括以下步驟：

(1)青霉素的降解及荷移復合物的形成：配制青霉素鈉濃度0.01～ 100mg/L的標準工作無水乙醇液，用稀HCl調至pH?2±0.5，沸水浴10～30min 使其降解，得到降解產(chǎn)物青霉胺，降解產(chǎn)物再與濃度為1×10^-3～10× 10^-3mol/L的苯醌類物質在常溫下反應5～10min，得到青霉胺荷移復合物， 備用；或是將標準工作無水乙醇液用稀HCl調至pH?4±0.5，沸水浴10～30 min使其降解，得到降解產(chǎn)物青霉烯酸，降解產(chǎn)物再與濃度為1×10^-3～10× 10^-3mol/L的苯醌類物質在常溫下反應5～10min，得到青霉烯酸荷移復合物， 備用；

(2)測定波長的選擇：將步驟1得到的青霉胺荷移復合物在紫外分光 光度計下測定紫外最大吸收波長，或是將得到的青霉烯酸荷移復合物在熒光 分光光度計下測定熒光的激發(fā)和發(fā)射光譜；其中，所述的紫外吸收或是熒光 的激發(fā)發(fā)射波長的測定選擇范圍為200nm～600nm；

(3)針對不同的荷移復合物分別計算吸收光強度與荷移復合物的線性 范圍、回收率、標準偏差、檢測限和工作曲線；

(4)樣品前處理：將牛奶樣品與脫蛋白、脫脂肪沉淀劑混合均勻，在 轉速800～3000r/min條件下離心分離3～10min，取上清液備用；

(5)樣品測定：取步驟4中的上清液，按照步驟1進行降解、荷移反 應，得到相應的荷移復合物，再按照步驟2的要求測定紫外最大吸收波長或 熒光的激發(fā)和發(fā)射光譜，計算該荷移復合物的吸收度，代入步驟3所得的該 類荷移復合物的工作曲線中即可求得牛奶中青霉素的殘留量。

2.根據(jù)權利要求1所述的檢測牛奶中青霉素殘留量的方法，其特征在 于：步驟(1)中，以水、甲醇、乙醇、異丙醇或丙酮中的一種作為反應介 質；所述的苯醌類物質為苯醌、甲氧基苯醌、四氯苯醌或四氰基對二次甲基 苯醌中的一種。

3.根據(jù)權利要求1所述的檢測牛奶中青霉素殘留量的方法，其特征在 于：步驟(4)中所述的脫蛋白、脫脂肪沉淀劑選自pH2的酸性乙腈、三氯 乙酸、鎢酸鈉、醋酸鈉或醋酸鉛中的一種。

4.根據(jù)權利要求3所述的檢測牛奶中青霉素殘留量的方法，其特征在 于：當使用酸性乙腈或三氯乙酸時將其與牛奶等體積混合；使用鎢酸鈉、醋 酸鈉或醋酸鉛時按牛奶重量的2～10％重量百分數(shù)混合。