[發明專利]用于抑制LeY糖抗原合成的巖藻糖基轉移酶Ⅳ的RNA干涉序列及重組干涉質粒

無效

• 申請號: 201010108583.1
• 申請日: 2007-01-15
• 公開（公告）號: CN102094019A
• 公開（公告）日: 2011-06-15
• 發明（設計）人: 張振波;閆杰;劉基巍;富力;王曉琦;燕秋
• 申請（專利權）人: 燕秋
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/85;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 大連萬友專利事務所 21219
• 代理人: 王發

1.一種用于抑制LeY腫瘤寡糖抗原合成的巖藻糖基轉移酶IV所構建的重組的巖藻糖基轉移酶IV干涉序列FUT4-1，其特征在于：其序列如下：GCCTGGCAAGTAACCTCTT。

2.一種用于抑制LeY腫瘤寡糖抗原合成的巖藻糖基轉移酶IV所構建的重組的巖藻糖基轉移酶IV干涉質粒，其特征在于：它是以RNA干涉載體pSilencer-4.1-CMV?neo的多克隆特異酶切位點為基礎，設計與干涉載體有相同粘性末端的FUT4SiRNA模板的DNA序列，構建1個FUT4的含FUT4-1干涉序列的干涉質粒：pSilencer-4.1-FUT4-1。

3.一種用于抑制LeY腫瘤寡糖抗原合成的巖藻糖基轉移酶IV所構建的重組的巖藻糖基轉移酶IV干涉質粒的制備方法，其特征在于：①將合成的用于干涉FUT4基因的FUT4-1干涉序列的模板DNA，用去離子水或者TE緩沖液溶解，測定260nm的吸光值，并計算DNA濃度，②取溶解后的樣品加入DNA退火緩沖液中，于90-98℃變性3-10分鐘，冷卻后低溫保存備用，③對RNA干涉載體pSilencer-4.1-CMV-neo于37℃進行特異限制性內切酶消化，產生與干涉序列匹配的粘性末端，④酶切產物純化后與②中制備保存的產物進行連接，⑤將上述連接產物轉化感受態細菌并利用載體的抗性標記篩選陽性克隆子，⑥提取質粒后進行酶切鑒定，⑦用酶切鑒定正確的克隆子制備質粒。

4.一種用于抑制LeY腫瘤寡糖抗原合成的巖藻糖基轉移酶IV所構建的重組的巖藻糖基轉移酶IV干涉質粒，其特征在于：該重組的含FUT4-1干涉序列的巖藻糖基轉移酶IV干涉質粒作為制備抗腫瘤藥物應用。