[發明專利]防治番茄青枯病的真菌菌劑及其制備方法

無效

• 申請號: 201010107074.7
• 申請日: 2010-02-08
• 公開（公告）號: CN101914449A
• 公開（公告）日: 2010-12-15
• 發明（設計）人: 薛智勇;朱鳳香;王衛平;洪春來;陳曉旸;吳傳珍;楊友坤;奚輝
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A01N63/04;A01P1/00;C12R1/885
• 代理公司: 杭州豐禾專利事務所有限公司 33214
• 代理人: 沈伾伾

技術領域

本發明涉及蔬菜病害生物防治技術領域，尤其涉及一種防治番茄青枯病的真菌菌劑及其制備方法。

背景技術

番茄青枯病是由茄青枯拉爾氏菌[Ralatonia?solanacearum(smith)Yabuuchi?et?al]引起的，在世界范圍內廣泛傳播的毀滅性土傳病害，熱帶、亞熱帶的國家和地區，如：南美洲、日本、印度、菲律賓，我國臺灣、廣東、浙江、福建、江蘇、湖北、四川、重慶等地區嚴重發生。該病可造成植株大面積萎蔫死亡，一般田塊發病率為10％～15％，重病田發病率高達80％～98.5％，導致番茄產量嚴重下降，造成重大的經濟損失。

R.solanacearum是一種土壤習居菌，能夠在無寄主情況下的土壤中存活很長時間。R.solanacearum主要從根系侵入植株，也可從莖部傷口侵入并直接進入導管系統，在其中大量繁殖并產生代謝物質，阻礙植物體內水分運輸，造成植株萎蔫。目前，針對番茄青枯病還缺少有效的化學藥劑，加之青枯菌對化學農藥易產生抗藥性，而且大量使用化學農藥會造成環境污染和生產成本上升。休耕期撒施石灰可減輕病害發生，但易造成土壤板結?？共∮N工作，由于缺乏理想的抗源材料，進展緩慢。水早輪作要求輪作年限較長，且只有在附近無其它宿主存在的情況下方可起到良好的效果，因而實施起來較困難。土壤滅菌后形成了土壤生物真空，一旦土壤受到病原菌侵染，會導致病原菌的大爆發而造成更為嚴重的后果。生物防治作物病害具有可利用資源豐富、成本低廉、能夠避免環境二次污染等優點，被認為是解決土傳病害的一條有希望的技術途徑。其中，利用拮抗微生物進行病害防治是生物防治中的一個重要發展方向。市場上已有一些利用病原菌拮抗菌防治植物病害的微生物菌劑、菌肥等產品，也有一些番茄青枯病生物防治的報導，但是目前還未見一家產品田間應用效果好、防效穩定的報導。而且微生物菌劑、菌肥使用效果受環境條件影響較大，不同環境條件來源的菌種適應范圍有限。本發明菌劑中應用的菌株從浙江麗水地區番茄種植地分離而得，對浙江省及氣候環境條件相近的省份可能具較強的適應性。

發明內容

本發明目的在于，針對番茄青枯病缺少有效的化學藥劑，加之青枯菌對化學農藥易產生抗藥性的缺陷，提出一種能有效防治番茄青枯病的真菌菌劑；本發明的另一目的是提出該菌劑簡易、低成本的制備方法；本發明的再一目的是提出該菌劑簡單、有效的應用方法。

本發明目的通過以下技術方案來實現。

一種Trichoderma?gamsii菌株6-18的篩選與鑒定：

一、2008年，從浙江嘉善、麗水、杭州等番茄種植基地采集到21個土樣，利用馬丁氏培養基進行培養、分離，共分離到真菌270余株；然后進行平板拮抗試驗，從中篩選到對番茄青枯病茄青枯拉爾氏菌有較好拮抗效果的初篩真菌15株；通過盆栽試驗，從浙江麗水采集的土樣中進一步篩選得到對番茄青枯病茄青枯拉爾氏菌具有穩定拮抗效果的復篩菌株6-18；

二、菌株6-18的形態特征、培養特征及基因測序：

1.菌落形態、顯微形態及培養特征：

菌株6-18在PDA培養基上菌落生長較快，黑暗條件下，25℃培養3天菌落直徑為40-50mm；菌落呈白色，平鋪，絮狀；背面無色素，有明顯泥土氣味；菌絲有隔膜，直徑2-10微米，形成球形厚垣孢子(見圖1)，壁光滑，直徑6-14微米，未觀察到分生孢子。

2、菌株6-18的rRNA基因序列測定：

包括18S?rRNA片段，ITS1、5.8S?rRNA、ITS2的全序列及28S區序列片斷(測序引物：ITS4)