[發明專利]一種轉基因大豆檢測用質粒標準分子及其構建方法

無效

• 申請號: 201010106138.1
• 申請日: 2010-02-05
• 公開（公告）號: CN101775440A
• 公開（公告）日: 2010-07-14
• 發明（設計）人: 李飛武;張明;李蔥蔥;劉娜;邢珍娟;宋新元;邵改革;康嶺生;董立明;夏蔚;趙寧
• 申請（專利權）人: 吉林省農業科學院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/63;C12N15/66
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司 22100
• 代理人: 余巖

1.一種轉基因大豆檢測用質粒標準分子，其特征在于：通過特異性PCR引物，從轉基因大豆MON89788基因組DNA中擴增出大豆內標準基因lectin特異性序列、MON89788大豆3′端轉化體特異性序列和5′端轉化體特異性序列，利用酶切、連接、轉化分子克隆技術將這3個片段依次構建到質粒載體pMD18-T中，獲得質粒標準分子pMD-LM3M5。

2.權利要求1所述的一種轉基因大豆檢測用質粒標準分子的構建方法，其特征在于包括如下步驟：

(1)利用GenBank數據庫和文獻檢索，獲得大豆內標準基因lectin、轉基因大豆MON897883′端和5′端轉化體特異性序列；

(2)根據lectin基因序列、MON89788大豆的3′端和5′端轉化體特異性序列，設計特異性定性PCR引物，對轉基因大豆MON89788陽性標準品的基因組DNA進行PCR擴增；

(3)分別回收lectin基因以及MON89788大豆3′端和5′端轉化體特異性序列的定性PCR產物，將lectin基因PCR回收產物構建到質粒載體pMD18-T上獲得中間質粒分子pMD-L；

(4)將中間質粒分子pMD-L和MON89788大豆3′端轉化體特異性序列PCR回收產物，用限制性內切酶BamHI和EcoRI分別進行雙酶切，回收這2種酶切產物，用T4DNA連接酶連接獲得中間質粒分子pMD-LM3；

(5)將中間質粒分子pMD-LM3和MON89788大豆5′端轉化體特異性序列PCR回收產物，用限制性內切酶NcoI和EcoRI分別進行雙酶切，回收這2種酶切產物，用T4DNA連接酶連接獲得質粒標準分子pMD-LM3M5。

3.權利要求1所述的大豆內標準基因lectin特異性序列，是由SEQ?ID?NO1和SEQ?ID?NO2組成的引物對，擴增MON89788大豆獲得的擴增子序列。

4.權利要求1所述的MON89788大豆3′端轉化體特異性序列，是由SEQ?ID?NO3和SEQ?ID?NO4組成的引物對，擴增MON89788大豆獲得的擴增子序列。

5.權利要求1所述的MON89788大豆5′端轉化體特異性序列，是由SEQ?ID?NO5和SEQ?ID?NO6組成的引物對，擴增MON89788大豆獲得的擴增子序列。