[發明專利]一種低溫堿性磷酸酶及其制備方法有效
| 申請號： | 201010102792.5 | 申請日： | 2010-01-28 |
| 公開（公告）號： | CN102140444A | 公開（公告）日： | 2011-08-03 |
| 發明（設計）人： | 丁澦;陸致晟 | 申請（專利權）人： | 復旦大學 |
| 主分類號： | C12N9/16 | 分類號： | C12N9/16;C12N15/55;C12N15/70 |
| 代理公司： | 上海正旦專利代理有限公司 31200 | 代理人： | 吳桂琴;包兆宜 |
| 地址： | 20043*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 低溫 堿性磷酸酶 及其 制備 方法 | ||
1.一種低溫堿性磷酸酶，其特征在于，其核苷酸編碼序列如SEQ?ID?NO?1所示。
2.一種制備權利要求1所述的低溫堿性磷酸酶的方法，其特征在于，將如序列表SEQ?ID?NO?1所示的低溫堿性磷酸酶的cDNA序列克隆到基因工程載體，表達，獲得低溫堿性磷酸酶。
3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，首先，合成如序列表SEQID?NO?1所示的低溫堿性磷酸酶的cDNA序列；然后，利用基因工程方法在18～25℃誘導表達過夜；最后，分離純化低溫堿性磷酸酶。
4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，分離純化的過程是：
1)將表達低溫堿性磷酸酶的宿主菌破菌、離心分離出蛋白；
2)將步驟(1)中的上清液使用Ni-NTA親和層析柱純化，去除雜蛋白。
5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，通過高效液相色譜技術去除雜蛋白。
6.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，將所得蛋白洗脫液用透析法對蛋白溶液進行置換。
7.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，將所得蛋白洗脫液使用Q離子交換柱進一步純化。
8.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，該制備方法還包括對分離純化后的低溫堿性磷酸酶的蛋白溶液進行濃縮。
9.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述的濃縮是用超濾滲析法對蛋白溶液進行濃縮。
10.一種表達載體或者克隆載體，其特征在于，它含有如SEQID?NO?1所示的核苷酸編碼序列。
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