[發(fā)明專利]一種基于毛細(xì)管區(qū)帶電泳方式的細(xì)胞活性檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010102635.4
• 申請日: 2010-01-29
• 公開（公告）號: CN101782509A
• 公開（公告）日: 2010-07-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 屈鋒;丁金美;張璐;江倫;郝帥;胡美齡
• 申請（專利權(quán)）人: 北京理工大學(xué)
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33;C12Q1/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于毛細(xì)管區(qū)帶電泳方式的細(xì)胞活性檢測方法，其特征在于包括 以下步驟：

步驟一、對待測細(xì)胞樣品進(jìn)行預(yù)處理

用細(xì)胞染料將待測細(xì)胞染色，離心后移去上清液，再加入磷酸鹽緩沖液清 洗細(xì)胞，直至將殘留細(xì)胞染料洗凈為止；之后，向清洗后的細(xì)胞沉淀中加入細(xì) 胞固定液，由此對細(xì)胞進(jìn)行固定化處理，細(xì)胞固定液和固定時間根據(jù)細(xì)胞染料 特點和細(xì)胞性質(zhì)進(jìn)行選擇；最后，用磷酸鹽緩沖液清洗細(xì)胞，直至除去剩余的 細(xì)胞固定液；

其中，所述細(xì)胞染料為各種活細(xì)胞染料；所述細(xì)胞固定液為常用細(xì)胞固定 液中的任意一種；

步驟二、進(jìn)行細(xì)胞懸浮液的配制

向步驟一得到的細(xì)胞沉淀中加入電泳緩沖液，混勻后得到細(xì)胞懸浮液；然 后，用細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)確定出細(xì)胞濃度，再用電泳緩沖液調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度至10⁴-10⁷個/ml范圍；

其中，所述電泳緩沖液選用常用毛細(xì)管電泳緩沖液中的任意一種；

步驟三、采用毛細(xì)管電泳儀進(jìn)行毛細(xì)管區(qū)帶電泳檢測細(xì)胞

將步驟二中配制好的細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)移至毛細(xì)管電泳進(jìn)樣瓶中，采用壓力進(jìn) 樣或電進(jìn)樣，使細(xì)胞懸浮液進(jìn)入毛細(xì)管一端；然后加電壓，使細(xì)胞懸浮液在毛 細(xì)管內(nèi)移動并通過二極管陣列檢測器；此時，在選定的紫外波長和可見波長下 同時檢測進(jìn)樣細(xì)胞，將所有電泳峰的峰面積相加，得到峰面積總和，由其表示 細(xì)胞在相應(yīng)波長下的吸光值，用紫外和可見兩波長的吸光值的乘積即可表示細(xì) 胞活性的量值；

其中，所述毛細(xì)管區(qū)帶電泳所用毛細(xì)管的長度為30-60cm，內(nèi)徑為 10-100μm；采用壓力進(jìn)樣時的壓強(qiáng)為5-250mbar，進(jìn)樣時間為3-30s；采用電進(jìn) 樣方式時，電壓為500V-30KV，進(jìn)樣時間為3-30s；加電壓時的電泳電壓為 5-30KV；檢測時采用的紫外波長范圍為180-300nm，可見波長直接采用細(xì)胞染 料的最大吸收波長值。

2.如權(quán)利要求1所述的一種基于毛細(xì)管區(qū)帶電泳方式的細(xì)胞活性檢測方法， 其特征在于：所述步驟一中的固定化處理過程在15-30℃溫度范圍內(nèi)進(jìn)行。