[發明專利]一種同時檢測32個單核苷酸多態性位點基因型的方法

無效

• 申請號: 201010100715.6
• 申請日: 2010-01-26
• 公開（公告）號: CN101851672A
• 公開（公告）日: 2010-10-06
• 發明（設計）人: 田亞平;張陽東
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍總醫院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京君智知識產權代理事務所 11305
• 代理人: 鄭明

技術領域

本發明涉及一種同時檢測32個單核苷酸多態性位點的方法。屬于醫學分子生物學領域。

背景技術

近年來，隨著人們生活水平的提高和生活方式的改變，冠心病已成為當今危害我國人民健康和生命的主要疾病，其患病率呈逐年上升趨勢，死亡率已超過腫瘤而躍居第一。其發病是遺傳因素和環境因素共同作用的結果。冠心病的發生主要是由于動脈粥樣硬化斑塊導致的。動脈粥樣硬化的形成受多方面因素的影響。大量的臨床實驗證實，血脂水平在動脈粥樣硬化的發生和發展方面起了重要作用。血脂紊亂成為冠心病和動脈粥樣硬化的主要危險因素。此外，炎癥反應也貫穿動脈粥樣硬化的整個過程，炎癥反應的激活可能是導致斑塊不穩定從而導致急性冠狀動脈綜合征的主要因素。目前認為血管內(內皮功能受損、氧化應激等)和血管外(感染等)因素導致炎癥反應的發生，炎癥反應又引起細胞因子的產生，進一步誘導急性時相反應物及一些炎癥應答相關的效應分子的表達。

隨著科學技術的發展，臨床上對冠心病的診斷手段日趨完善。早期診斷或排除冠心病對其預后極其重要。心電圖是心血管疾病診斷、治療的常用手段，它具有簡便、快速、價廉、無創和重復性好等優點，但其敏感性差、假陽性率高，易漏診、誤診。二維超聲心動圖、放射性核素心肌灌注顯像、電子束CT等對冠心病的診斷具有較高的敏感性和特異性，但儀器價格昂貴，而冠脈造影術雖然是冠心病診斷的金標準，因其技術復雜，且具有一定的創傷性，因而也較難普及。

隨著分子生物學理論和分子生物學技術的進展，冠心病的基因機制及基因檢測在冠心病診斷中的應用研究日益受到重視。基因組水平上由單個核苷酸的變異可引起DNA序列的多態性，這是引起個體間遺傳差異的主要原因。這種單核苷酸的多態性造成了人類在疾病易感性等方面的不同。如核苷酸的變異在種群中的頻率大于1％則稱為單核苷酸多態性。已知在人類基因組中大約存在1500萬個單核苷酸多態性位點，即平均每300～600bp存在一個堿基突變。這些單核苷酸多態性位點可能正是生物多樣性(包括群體水平與個體水平)的物質基礎，也是多基因復雜疾病及個體間患病風險與藥物不同反應的物質基礎。單倍體型是位于一條染色體上或某一區域的一組相關聯的單核苷酸多態性位點。單核苷酸多態性的基因型頻率、等位基因頻率及單倍體型頻率都可能與疾病相關。標簽單核苷酸多態性是指能代表一個染色體區域其他眾多位點信息的單核苷酸多態性位點。因此研究標簽單核苷酸多態性，可以提供該區域內大多數的遺傳多態模式，極大提供關聯分析的有效性。檢測單核苷酸多態性進行疾病的相關性分析，可以從遺傳的角度將疾病的基因診斷提高到單堿基水平。單核苷酸多態性作為一種最普遍的遺傳變異類型，在遺傳性疾病研究、群體遺傳學、藥物基因組學、法醫學、藥物開發及復雜疾病的研究中也越來越受到關注。

隨著單核苷酸多態性研究的深入，國內外學者發現了多個與冠心病易感性密切相關的單核苷酸多態性位點。內收蛋白1是一種細胞膜骨架蛋白，內收蛋白1基因第10外顯子存在G614T點突變，使氨基酸序列第460位的甘氨酸(Gly)被色氨酸(Trp)取代。研究發現內收蛋白1基因的Gly460Trp多態性不僅與冠心病密切相關(Alanna?C.M，Molly?S.B，Aaron?R.F，et?al.ADD1?460W?allele?associated?with?cardiovascular?disease?in?hypertensive?individuals.Hypertension，2002，39(6)：1053-1057)，而且還與冠心病的危險因子高血壓及大動脈彈性密切相關，是高血壓后冠心病發病率和死亡率的理想預警因子(Yan?L，Lutgarde?T，Tatiana?K，et?al.Cardiovascular?risk?inrelation?to?a-Adducin?Gly460Trp?polymorphism?and?systolic?pressure.Hypertension，2005，46(3)：527-532)。