[發明專利]一種同時檢測32個單核苷酸多態性位點基因型的方法

無效

• 申請號: 201010100715.6
• 申請日: 2010-01-26
• 公開（公告）號: CN101851672A
• 公開（公告）日: 2010-10-06
• 發明（設計）人: 田亞平;張陽東
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍總醫院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京君智知識產權代理事務所 11305
• 代理人: 鄭明

1.一種同時檢測32個單核苷酸多態性位點的方法，這些基因及32個標簽單核苷酸多態性位點是內收蛋白1基因：rs3775067、rs1263359，血小板內皮細胞黏附分子-1基因：rs503550，C-反應蛋白基因：rs1205，內皮固有型一氧化氮合酶基因：rs7830、rs3918188，漿細胞膜糖蛋白1基因：rs12528076、rs858341、rs021966、rs858345、rs9308995，L-選擇素基因：rs964555、rs2205848、rs4987318、rs2298900，G蛋白β3亞單位基因：rs5445，血管緊張素I轉換酶基因：rs4333、rs4305、rs4353，血管緊張素II?1型受體基因：rs6801836、rs2675511、rs5182，血管緊張素原基因：rs1926722、rs7539020、rs3889728、rs493132、rs478523，亞甲基四氫葉酸還原酶基因：rs1801133、rs9651118、rs6541003和肝脂肪酶基因：rs12462668、rs10426971，其特征在于檢測方法包括下述步驟：

(1)設計并合成用于擴增32個單核苷酸多態性位點的序列1至序列96引物，每個單核苷酸多態性設計3個引物，其中2個為PCR擴增引物，用于擴增出含有目的單核苷酸多態性位點的片斷；1個為延伸引物，用于單核苷酸多態性位點的測序及與玻璃芯片上的寡核苷酸鏈雜交；

(2)稀釋并混合PCR引物，對目標DNA進行PCR擴增；

(3)對擴增產物進行純化；

(4)稀釋并混合延伸引物，進行延伸反應；

(5)雜交；

(6)對雜交板進行熒光掃描，根據熒光信號判斷單核苷酸多態性位點的基因型。

2.根據權利要求1所述的一種同時檢測32個單核苷酸多態性位點的方法，其特征在于所述的步驟(2)中將PCR引物稀釋并混合使其終濃度為2.5μM，構建PCR引物池，每96人份PCR反應體系為：

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試劑成分?????????????體積(μL)

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引物池(2.5μL)???????11.2

脫氧核苷酸(2.5mM)????20

10倍PCR緩沖液II??????56.2

氯化鎂(25mM)?????????112.6

金牌擴增酶(5U/μL)???11.2

雙蒸水???????????????126????

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3.根據權利要求1所述的一種同時檢測32個單核苷酸多態性位點的方法，其特征在于所述的步驟(2)中PCR循環條件為：

4.根據權利要求1所述的一種同時檢測32個單核苷酸多態性位點的方法，其特征在于所述的步驟(4)中將延伸引物稀釋并混合使其終濃度為5μM，構建延伸引物池。每96人份PCR反應體系為：