[發明專利]頭花蓼總黃酮、總鞣質和沒食子酸類化合物的制備方法

無效

• 申請號: 201010041801.4
• 申請日: 2010-01-04
• 公開（公告）號: CN101732421A
• 公開（公告）日: 2010-06-16
• 發明（設計）人: 廖尚高;王永林;張麗娟;蘭燕宇;王愛民;李勇軍;何迅;黃勇;詹哲浩
• 申請（專利權）人: 貴陽醫學院
• 主分類號: A61K36/704
• 分類號: A61K36/704;A61K31/192;A61P13/00;A61P31/00;A61P13/04
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技術領域

本發明屬于天然藥物有效成分提取領域。

背景技術

頭花蓼(Polygonum?capitatum)又名石莽草、四季紅、紅酸桿、省丁草等，屬于蓼科(Polygonaceae)蓼屬(Polygonum)多年生草本植物，是貴州省民間常用草藥，主要用于泌尿系統感染、泌尿系結石等癥的治療。

目前，頭花蓼已成為貴州省“六大苗藥”和重點培育發展的的品種之一，以頭花蓼為主要原料并被國家標準收載的已有多種藥物制劑，并有多個相關專利(見表1)，但是，頭花蓼相關產品多是水提物和醇提物，其所含成分復雜、往往多種成分共存，但確切的活性部位尚無明確報道，因而其相關藥物的質量控制也缺乏充分依據。上述諸多專利依據各種分光光度法的檢測結果將某種活性歸為其中的一類(個)成分的單獨或多類(個)成分的協同作用，但由于缺乏獲得各類化合物的有效手段，所得結論缺乏說服力。王祥培等曾用60％丙酮浸泡頭花蓼藥材，并分別用乙醚和乙酸乙酯萃取得到總鞣質，并研究了其抗炎活性[王祥培.頭花蓼的鑒別與質量評價研究(D)，成都中醫藥大學博士學位論文，2006，第三部分：36-43]，但60％丙酮浸泡可能會將黃酮類成分一起提取出來，乙醚和乙酸乙酯萃取也并不能將黃酮分開并得到所有鞣質，因此這種樣品制備方法實際有很多不合理之處。本發明正是依據沒食子酸類化合物、黃酮類化合物和鞣質類化合物的結構特點及理化性質，利用多種檢測手段，找到了一種有效地富集純化頭花蓼總黃酮和總鞣質及沒食子酸類化合物的方法，為尋找頭花蓼有效部位提供了一種科學的樣品制備方法。

表1與頭花蓼相關的專利

發明內容

本發明目的在于克服現有技術的缺點與不足，提供一種有效地富集頭花蓼總黃酮和總鞣質及沒食子酸類化合物的方法，為尋找頭花蓼有效部位提供了一種科學的樣品制備方法。本發明采取的具體技術方案是：

(1)將頭花蓼全草粉末加40-80％乙醇(或甲醇或丙酮)冷浸或回流提取1-4次，濾液合并濃縮；

(2)濃縮液或浸膏上D101大孔樹脂，用70-85％乙醇(或甲醇)洗脫，收集洗脫液回收乙醇(或甲醇)；

(3)所得濃縮液或浸膏用水溶解后上MCI柱，水洗脫，直至TLC(氯仿/甲醇/甲酸＝9/1/0.1)檢測無沒食子酸為止，洗脫液濃縮至一定體積后加乙醇至含醇量達70％以上，抽濾，濾液回收乙醇，濃縮至浸膏得沒食子酸類化合物；

(4)MCI柱上余下部分再用85％甲醇(或80％乙醇)洗脫至無色，回收甲醇(或乙醇)，濃縮。所得浸膏用95％乙醇溶解后上Sephadex?LH-20，先用95％乙醇洗脫至無色，洗脫液回收乙醇，濃縮至浸膏，得黃酮類化合物。洗脫過程中隨時取少量洗脫液抽干溶劑后用水溶解，用NaCl-明膠法、濃鹽酸法、飽和石灰水法或HPLC法檢測確保所得黃酮中沒有鞣質；

(5)當濃氨水法檢測所得洗脫液中沒有黃酮時，用50-100％丙酮梯度洗脫Sephadex?LH-20柱上余下部分至無色，洗脫液回收丙酮，濃縮至浸膏得鞣質類化合物。

本發明的樣品制備過程中，依據沒食子酸類化合物、黃酮類化合物和鞣質類化合物的化學結構和理化性質，尤其是它們在不同分離介質中的色譜性質，找到了有效地檢測總黃酮和總鞣質的簡便易行的方法，得到的總黃酮和總鞣質純度較高，可以用于頭花蓼相關藥理研究、產品開發和提高其相關產品的質量和藥效。

具體實施方式

下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。以下實施例僅用于說明本發明而不應將此理解為本發明上述主題的范圍僅限于以下的實例。此外應理解，在閱讀了本發明講授的內容之后，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范圍。同時為了簡單和清楚的目的，下文恰當的省略了公知技術的描述，以免那些不必要的細節影響對本技術方案的描述。

實施例1：

(1)將8.5kg頭花蓼全草粉末加3倍量70％乙醇冷浸3次，每次3天，濾液合并濃縮；

(2)浸膏用80％乙醇溶解后上D₁₀₁大孔樹脂，收集80％乙醇洗脫液，洗脫液回收乙醇，濃縮至浸膏；

(3)所得浸膏用水溶解后上MCI柱，水洗脫，直至TLC(氯仿/甲醇/甲酸＝9/1/0.1)檢測無沒食子酸為止，洗脫液濃縮至一定體積加95％乙醇至含醇量達70％，抽濾，濾液回收乙醇，濃縮至浸膏得沒食子酸類化合物；