[發明專利]免疫原、組合物及其用途和制備方法

有效

• 申請號: 200980163333.3
• 申請日: 2009-12-10
• 公開（公告）號: CN102811732A
• 公開（公告）日: 2012-12-05
• 發明（設計）人: M·A·佩雷拉達康瑟考;S·J·馬奎斯達考斯塔;A·M·奧利維拉卡斯特羅;A·A·達西爾瓦阿爾梅達
• 申請（專利權）人: 科英布拉農業大學;HITAG-生物技術有限公司
• 主分類號: A61K39/00
• 分類號: A61K39/00;A61K39/39
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 李程達

技術領域

本發明涉及免疫原的制備、其制備方法以及其在表達系統中用于產生重組蛋白的用途。

本發明描述了通過綴合（通過化學或物理方法）添加至無關抗原或通過整合入重組抗原或整合在包含抗原的無關序列的質粒DNA鏈中而添加至無關抗原的序列，其目的在于產生針對所述無關抗原的免疫應答。

本發明描述了新的佐劑，其應用可導致免疫原（包括含有肽序列的重組蛋白）的產生，所述免疫原誘導免疫應答，其特征在于產生特異性抗體。在本申請中，無關片段產生（對于低免疫原性的抗原）免疫特性，其引起（僅通過向宿主施用）宿主產生免疫應答，特征特別地在于產生特異性免疫球蛋白。

發明概述

本發明的目的是描述因將肽（具有來源于肝片形吸蟲的鈣結合蛋白的被稱作H片段的MPSVQEVEKLL序列）添加至無關抗原而產生免疫原的方法。所得的構建體具有以下免疫特性：當給個體施用時觸發特征在于針對無關抗原的特定抗體的產生的免疫應答。

本發明對于目的在于通過施用由片段H和無關抗原組成的免疫原而由個體產生針對抗原的免疫應答的任何應用是有用的。

本發明描述了新型佐劑的應用，所述佐劑可在研究和開發或工業水平上用于下列領域：例如多克隆和單克隆抗體的產生、免疫療法和免疫預防。

本發明代表目前佐劑的另一選擇并且，當用于表達重組抗原的系統中時允許這樣的蛋白質的產生，所述蛋白質具有在無任何其它添加劑的情況下導致能夠產生免疫應答的個體產生免疫應答的免疫原性特征。目前，抗體的制備中的最大挑戰之一是獲得充足的免疫原性抗原來產生免疫應答。當抗原不具有免疫原性或免疫性較低時，抗原和佐劑的施用用于增強免疫應答。此類佐劑具有潛在毒性，可引起被注射的宿主的疼痛，從而其使用是被高度勸阻的，或者，許多佐劑甚至被禁用。本申請的有利方面在于現有技術中這一點上，因為其描述了允許獲得具有在不使用佐劑的情況下產生免疫應答的免疫原性特征的經修飾的抗原的方法。

本發明的實施方式之一是由如下組成的免疫原的描述：

-來自由肝片形吸蟲的成蟲排泄/分泌的鈣結合蛋白的氨基酸序列的部分，其與被稱作片段H的SEQ?ID?NO?2具有相同的序列或具有至少90%的結構相似性;

-無關目標蛋白質或蛋白質片段。

本發明的另一個優選實施方式是目標蛋白質或目標蛋白質片段是病原性蛋白質例如病毒蛋白質、細菌蛋白質或來自原生動物的蛋白質。甚至更優選地，目標蛋白質或蛋白質片段可以是CWG、CD4、IL5、Pfsp、Ent、PAL、CP12、LEC、BG或Toxo蛋白或蛋白片段。

在其它優選實施方式中，上文中描述的免疫原可用作藥劑。甚至更優選可用作疫苗或佐劑。我們注意到，在一些情況下甚至更優選，可用作疫苗，所述疫苗僅包含：

-來自由肝片形吸蟲的成蟲排泄/分泌的鈣結合蛋白的氨基酸序列的部分，其與被稱作片段H的SEQ?ID?NO?2具有相同的序列或具有至少90%結構相似性；

-目標無關蛋白質或蛋白質片段。

另一個優選實施方式是包含上述免疫原的組合物的描述，優選地組合物可以包含治療有效量的免疫原和藥理學上適當的媒介物例如賦形劑、佐劑等等。

在另一個優選實施方式中，組合物可僅包含100%的上述免疫原之一。

在甚至更優選地進行中，組合物可由下列成分構成：具有在100至1000μl的緩沖磷酸鹽溶液(0.01M磷酸鹽,0.1M?NaCl,pH?7.2)中稀釋的1至100μg的濃度的上述免疫原。

本發明的另一個實施方式是包含上述免疫原之一或上述藥物組合物之一的佐劑的描述。

我們使用佐劑給小鼠施用，所述佐劑包含：添加至于100至1000μl體積的磷酸鹽緩沖液-0.01M磷酸鹽,0.1M?NaCl,pH?7.2中稀釋的1至100μg的片段CWG和CP12的片段H，該施用誘導其產生針對特定片段CWG和CP12的免疫應答的強度和速度上的增加。

本發明的另一個實施方案是包括上述免疫原之一或上述藥物組合物之一的疫苗的描述。我們使用佐劑給小鼠施用，所述佐劑包含：添加至于100至1000μl體積的磷酸鹽緩液-0.01M磷酸鹽,0.1M?NaCl,pH7.2中稀釋的1至100μg的片段CWG、BG和CP12的片段H，該疫苗的施用減小了隱孢子蟲屬（Cryptosporidium）和賈第蟲屬（Giardia）的實驗感染中發現的感染的強度。