[發明專利]由人類多能干細胞產生間充質干細胞的方法以及通過所述方法產生的間充質干細胞

在審

• 申請號: 200980163164.3
• 申請日: 2009-10-28
• 公開（公告）號: CN102686724A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發明（設計）人: 金孝洙;姜炫在;李銀珠;樸永培
• 申請（專利權）人: 財團法人首爾大學校產學協力團
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;C12N5/02;A61K35/48
• 代理公司: 北京同立鈞成知識產權代理有限公司 11205
• 代理人: 臧建明

1.一種由人類多能干細胞產生間充質干細胞的方法，所述方法包括：

a)由人類多能干細胞形成胚胎體；

b)使所述胚胎體附著到培養皿以誘導所述胚胎體自發分化為間充質干細胞；以及

c)以增殖性方式培養所述間充質干細胞，同時維持所述間充質干細胞的一致性。

2.根據權利要求1所述的方法，其中將步驟a)的所述人類多能干細胞培養14天以形成所述胚胎體。

3.根據權利要求1所述的方法，其中在含有胎牛血清的杜爾伯科改良伊格爾培養基的堿性組分中培養步驟b)的所述胚胎體，從而誘導其分化。

4.根據權利要求1所述的方法，其中通過在不添加外部細胞因子的情況下形成自體細胞因子回路而出現步驟b)的所述自發分化的誘導。

5.根據權利要求4所述的方法，其中所述自體細胞因子為骨形態發生蛋白。

6.根據權利要求1所述的方法，其中通過使用含有人表皮生長因子、血管內皮生長因子、人堿性成纖維細胞生長因子、胰島素樣生長因子、氫化可的松以及抗壞血酸的培養基來培養步驟c)的所述間充質干細胞。

7.一種間充質干細胞，其由根據權利要求1到6中任一權利要求所述的方法產生。

8.一種細胞治療產品，其包括根據權利要求7所述的間充質干細胞。

9.根據權利要求8所述的細胞治療產品，其中所述細胞治療產品形成選自由脂肪細胞、骨細胞、軟骨細胞、肌細胞、神經細胞以及心肌細胞組成的群組中的細胞。

10.一種使用由根據權利要求1到6中任一權利要求所述的方法產生的間充質干細胞的方法，其作為用于培養細胞的飼養細胞。

11.根據權利要求10所述的方法，其中所述細胞為人類多能干細胞。

12.根據權利要求11所述的方法，其中所述人類多能干細胞經受30次傳代培養。

13.一種用于培養細胞的飼養細胞，其包括由根據權利要求1到6中任一權利要求所述的方法產生的間充質干細胞。

14.根據權利要求13所述的飼養細胞，其中所述細胞為人類多能干細胞。

15.一種用于由人類多能干細胞產生間充質干細胞的試劑盒，所述試劑盒包括：

a)胚胎干細胞培養基，其不含堿性成纖維細胞生長因子；

b)杜爾伯科改良伊格爾培養基，其含有10％(v/v)的胎牛血清；以及

c)培養基，其含有人表皮生長因子、血管內皮生長因子、人堿性成纖維細胞生長因子、胰島素樣生長因子、氫化可的松以及抗壞血酸。

16.一種用于由人類多能干細胞產生間充質干細胞的培養系統，所述培養系統包含：

a)培養人類多能干細胞并選擇培養14天的胚胎體；

b)使所述胚胎體附著到組織培養皿并通過使用含有胎牛血清的杜爾伯科改良伊格爾培養基培養基培養所述胚胎體，從而誘導所述胚胎體分化為間充質干細胞；以及

c)通過使用含有人表皮生長因子、血管內皮生長因子、人堿性成纖維細胞生長因子、胰島素樣生長因子、氫化可的松以及抗壞血酸的培養基維持并以增殖性方式培養所述間充質干細胞。