[發明專利]纖維蛋白和纖維蛋白原降解產物的檢測以及產生和用于癌的檢測和監測的相關方法

無效

• 申請號: 200980158402.1
• 申請日: 2009-03-30
• 公開（公告）號: CN102405413A
• 公開（公告）日: 2012-04-04
• 發明（設計）人: 安德烈婭·斯莫爾-霍華德
• 申請（專利權）人: AMDL有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/86
• 代理公司: 北京東方億思知識產權代理有限責任公司 11258
• 代理人: 李劍

技術領域

本發明一般地涉及生產針對纖維蛋白原和纖維蛋白降解產物(FDP)的抗體群的方法和涉及針對纖維蛋白原和纖維蛋白降解產物(FDP)的抗體群的產生，涉及抗體群本身和涉及相關的使用方法，涉及通過免疫化學測量血清中的FDP的量檢測癌和用于監測癌治療的進展。

背景技術

盡管對癌的理解有新的進展，但當前用于癌的篩查和識別的技術留有改進的空間。本領域中已知的用于篩查癌的方法試圖通過使用抗體來檢測癌相關抗原。抗原是大分子(例如蛋白、核酸或多糖)，其能在體內引起免疫應答。哺乳動物和其他動物的免疫系統具有檢測外源因子(例如與癌相關的抗原)和通過產生下述抗體而對這些外源因子應答的能力，所述抗體特異地靶向那些癌相關抗原并與那些癌相關抗原反應。因而，在哺乳動物的循環血液中的這些癌相關抗原或靶向這些抗原的循環抗體的檢測與在該個體中的癌的存在之間有強的關聯性。因此，檢測此類抗原或抗體的存在的試驗在癌的篩查和診斷中是有用的。

一種有前途的癌相關抗原靶是由纖維蛋白和纖維蛋白原二者的降解產物(FDP)組成的庫(pool)。雖然纖維蛋白和纖維蛋白原二者的降解產物的產生在健康個體中是被限制的，但當癌細胞釋放出蛋白水解酶(例如纖溶酶和凝血酶)時，FDP在癌患者中是過量產生的。此外，FDP被作為其他的癌相關過程(例如血管生成和轉移)的副產物產生。因為FDP從腫瘤滲漏到周圍液體中，在患有膀胱癌的受試者的尿中、在肺癌受試者的血漿中和在其他癌患者的血漿或血清中可測量到升高的FDP水平。FDP測量在癌診斷中的效用已被猜想了多年；但還沒有發展出具有所需的敏感性的能定量測量FDP的精制化的檢驗。當前的FDP檢驗通常被限制于測量作為該組的代表的一種特定的FDP組分，例如D-二聚體。

癌提高了纖維蛋白和纖維蛋白原降解產物(FDP)的水平，這都是通過產生纖維蛋白原降解產物和纖維蛋白降解產物二者的組織因子(TF)和尿激酶型纖溶酶原激活劑(uPA)調控途徑(圖1)。通過纖溶酶切割纖維蛋白原產生作為初級末端產物的片段D和E。凝血酶將纖維蛋白原轉化為纖維蛋白，作為對來自凝血級聯系統的信號的響應。通過纖溶酶切割纖維蛋白產生作為初級末端產物的D-二聚體。通過癌誘導的纖溶酶切割產生的FDP的組成受兩種底物——纖維蛋白和纖維蛋白原的相對量影響。

發明內容

本文公開了用于癌的檢測的方法，其包括對含有三種基本片段類型(片段D、片段E和D-二聚體)和任選地額外的三種片段類型(片段Y和初始纖溶酶消化產物-IPDP的兩種可辨別形式)總計六種FDP組分的纖維蛋白和纖維蛋白原降解產物(FDP)的確定混合物的同步檢測。方法包括用特異性多克隆抗體庫對生物樣品中的三種基本FDP抗原進行同時檢測，其中所述多克隆抗體對三種FDP片段是特異性的。

在本公開的一種實施方式中，提供了用于檢測受試者中的癌的方法，所述方法包括下述步驟：從受試者中獲得生物樣品；使生物樣品與抗體制劑反應，所述抗體制劑結合與纖維蛋白和纖維蛋白原降解產物(FDP)相關的至少三種抗原，以形成抗體-FDP復合物，其中三種FDP相關的抗原是片段D、片段E和D-二聚體；檢測抗體-FDP復合物；并診斷受試者中的癌。在另一實施方式中，抗體制劑額外地任選地與片段Y和初始纖溶酶消化產物(IPDP)中的至少一種結合。在另一實施方式中，抗體制劑是多克隆抗體制劑。

在另一實施方式中，所述方法包括酶聯免疫吸附檢驗。

在另一實施方式中，診斷步驟還包括至少一種額外的診斷測試。

在本公開的一種實施方式中，提供了用于監測患者中的癌的方法，其包括下述步驟：(a)從受試者中獲得第一生物樣品，所述第一樣品在第一取樣時間點收集；(b)從受試者中獲得第二生物樣品，所述第二樣品在第一取樣時間點之后的第二取樣時間點收集；(c)使生物樣品與抗體制劑反應，所述抗體制劑結合與FDP相關的至少三種抗原，以形成抗體-FDP復合物，其中三種FDP相關抗原是片段D、片段E和D-二聚體；(d)檢測抗體-FDP復合物；(e)確定第二生物樣品中的FDP水平與第一生物樣品中的FDP水平的比率；(f)對癌發展進行判斷；并任選地用在第一和第二時間點后的時間點下得到的額外的生物樣品重復步驟(a)-(e)。

在另一實施方式中，抗體制劑額外地任選地與片段Y和初始纖溶酶消化產物(IPDP)中的至少一種結合。在另一實施方式中，抗體制劑是多克隆抗體制劑。

在另一實施方式中，所述方法包括酶聯免疫吸附檢驗。