[發明專利]大規模的胰島純化

無效

• 申請號: 200980156514.3
• 申請日: 2009-12-23
• 公開（公告）號: CN102317444A
• 公開（公告）日: 2012-01-11
• 發明（設計）人: 松本慎一;霜田雅之
• 申請（專利權）人: 貝勒研究院
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12Q1/24
• 代理公司: 北京泛華偉業知識產權代理有限公司 11280
• 代理人: 劉丹妮

發明技術領域

本發明涉及一種分離胰島的方法，其是一種胰島移植的關鍵技術。更具體地，本發明涉及使用胰島分離領域的技術人員已知的常規實驗室設備和技術提高總胰島產量的儀器和方法。

發明背景

在不限制本發明范圍的情況下，用與胰島分離有關的方法和裝置來描述本發明的背景。

將胰島植入I型糖尿病患者體內的技術受到了大量公眾的注意，并且主要在歐洲和美國進行了努力來建立這項技術用于臨床治療，所述的I型糖尿病患者在不給予胰島素的條件下不能生存，即患有胰島素依賴性糖尿病。

胰島移植涉及細胞組織移植，其中在體內血糖調節中起重要作用的胰島細胞群通過注入門靜脈給予。胰島移植對于移植接受者是微創的，并且被認為是I型糖尿病患者最接近理想的治療。

在2000年，加拿大埃德蒙頓艾伯特大學報道了一種成功的臨床胰島移植的試驗。自這個報道以來，在4年的時間里主要在歐洲和美國大約進行了300個胰島移植。這些胰島移植是在艾伯特大學制定的埃德蒙頓方案的基礎上實施的。

然而，使用當前的技術，甚至在歐洲和美國實施的腦死亡供體的胰島移植中也沒有獲得一致的胰島產量，并且在一些情況下，移植的胰島也沒有有效地發揮作用。此外，即使是在全世界的基礎上考慮，也幾乎沒有無心跳供體的移植胰島成功的案例，這種情況比腦死亡的供體的情況還要差，事實上，至今無心跳供體的移植胰島是不可能的。

為了改善胰島移植的成功率，并且也為了實現無心跳供體的成功的胰島移植，移植大量適于移植的胰島是重要的。因此，迫切需要改善胰島分離技術以提高可移植的胰島的產量。

在移植的醫學治療中報道了一種在移植后給予器官移植患者烏司他丁或烏司他丁替代物的方法(見第2002-20309號日本未審查的專利公開)。

此外，報道了一種用于灌注或存儲預定用于移植的器官的溶液，該溶液提供了在肺移植中有價值的結果(見第H6-40801號日本未審查的專利公開)。然而，最佳的胰島移植方法，特別是關于胰島分離和純化技術，仍是難以捉摸的。

在授權給Benedict等人的第7,045,349號美國專利中，教導了一種這樣的儀器和方法，該專利是關于使用過程控制來分離胰島的方法。簡要的說，教導了一種“先進的胰島分離技術”，據說是將自動化的方法、自動化控制方法、過程控制接口和自動化設備合并以分離(隔開)和加工生理處理溶液的組織懸浮液中的胰島，利用微處理器控制器和計算機控制和軟件編程來連接和控制處理溫度、處理流速、氫濃度百分數(pH)、溶解氧濃度、內毒素濃度、溶解的一氧化氮濃度、一氧化氮合酶濃度、蛋白水解酶活性以及包含胰島的生理處理溶液的壓力，包括實時處理數據的獲得和處理變量的記載。

在Matsumoto等人提交的第20080038823號美國專利申請中還教導了另一項發明，關于分離胰島的方法。簡要的說，發明提供了胰島分離方法，包括下列步驟：將包含蛋白酶抑制劑的保護溶液注射到獲得的胰腺的胰管中；消化在其中注入了保護溶液的胰腺；并且使用含有密度梯度試劑的純化溶液純化該消化了的胰腺組織。本發明還提供了一種用于注射到胰管中的保護溶液，一種用于二層法的胰腺保存溶液，以及一種胰島純化溶液。

發明概述

本發明描述了一種使用大塑料瓶來增加胰島純化效率的新的純化方法。本發明的方法解決了與使用COBE?2991細胞處理器(COBE)和Ficoll密度梯度溶液的標準純化方法有關的，通過高剪切力容易機械地損壞胰島的問題。

在一個實施方案中，本發明包括分離胰島的設備和方法，所述方法包括：用減少破壞梯度的對流的彎管在容器中生成包含至少100毫升的連續的密度梯度；在該密度梯度中裝載包含胰島的溶液；離心該容器，其中對胰島的壓力小于50Pa；并且從該梯度中分離胰島。一方面，所述梯度和包含胰島的溶液用一種稀釋溶液封頂。另一方面，所述胰島是頂部裝載的并且其中梯度包含：在容器底部的高密度第一層，在高密度第一層上的包含連續的密度梯度的第二層，在第二層上的第三層，該第三層包含含有胰島消化物的低密度溶液；和在第三層上的包含稀釋溶液的第四層。在再一方面，所述胰島是底部裝載的并且其中梯度包括：在容器底部的含有胰島消化物的高密度第一層；在第一層上的包含連續的密度梯度的第二層；和包含稀釋溶液的第三層。