[發明專利]大規模的胰島純化

無效

• 申請號: 200980156514.3
• 申請日: 2009-12-23
• 公開（公告）號: CN102317444A
• 公開（公告）日: 2012-01-11
• 發明（設計）人: 松本慎一;霜田雅之
• 申請（專利權）人: 貝勒研究院
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12Q1/24
• 代理公司: 北京泛華偉業知識產權代理有限公司 11280
• 代理人: 劉丹妮

1.一種分離胰島的方法，所述方法包括：

用減少對流的彎管在容器中生成包含至少100毫升的連續的密度梯度，所述對流破壞梯度；

在該密度梯度中裝載包含胰島的溶液；

離心所述容器，其中對胰島的壓力小于50Pa；并且

從該梯度中分離胰島。

2.權利要求1所述的方法，其中所述梯度和所述包含胰島的溶液用稀釋溶液封頂。

3.權利要求1所述的方法，其中所述胰島是頂部裝載的并且其中所述梯度包含：

在容器底部的高密度第一層，

在高密度第一層上的包含連續的密度梯度的第二層，

在第二層上的第三層，該第三層包含含有胰島消化物的低密度溶液；知

在第三層上的包含稀釋溶液的第四層。

4.權利要求1所述的方法，其中所述胰島是底部裝載的并且其中所述梯度包含：

在容器底部的含有胰島消化物的高密度第一層；

在第一層上的包含連續的密度梯度的第二層；和

包含稀釋溶液的第三層。

5.權利要求1所述的方法，其中所述梯度包含連續密度的溶液，所述連續密度的溶液進一步定義為包含通過使用彎管改變低密度與高密度的體積比得到的低密度到高密度。

6.權利要求1所述的方法，其中所述梯度包含連續密度的溶液，所述連續密度的溶液進一步定義為包含低密度到高密度，所述低密度到高密度包含通過使用彎管改變碘克沙醇與ET-Kyoto溶液的體積比而產生的含有碘克沙醇到ET-Kyoto溶液。

7.權利要求1所述的方法，其中所述梯度包含連續密度的溶液，所述連續密度的溶液進一步定義為包含通過使用彎管改變碘克沙醇與ET-Kyoto溶液的體積比產生的低密度(密度：1.077)到高密度(密度：1.095-1.125)碘克沙醇-ET-Kyoto溶液。

8.權利要求1所述的方法，其中所述瓶子具有平滑的內表面。

9.權利要求1所述的方法，其中所述梯度是使用彎曲的頂端形成的，所述彎曲的頂端在生成梯度時能減少梯度中的對流。

10.權利要求1所述的方法，其中所述容器為200、250、300、400、500、600、700、800、900或1,000毫升。

11.權利要求1所述的方法，其中所述方法進一步包括從包含胰島細胞的收集容器中分離胰島細胞的步驟。

12.權利要求1所述的方法，其中所述方法進一步包括步驟：

從包含胰島細胞的收集容器中分離胰島細胞；

洗滌胰島細胞；并且

將胰島植入新的宿主體內。

13.權利要求1所述的方法，其中所述胰島為人類胰島。

14.權利要求1所述的方法，其中所述胰島為尸體的胰島。

15.一種分離胰島的方法，所述方法包括：

用減少對流的彎管在容器中生成包含至少100毫升的連續的密度梯度，所述對流破壞梯度，所述連續密度的溶液進一步定義為包含通過使用彎管制備的低密度(密度：1.077)到高密度(密度：1.095-1.125)；

在梯度上裝載稀釋溶液中的胰島細胞；

離心所述容器，其中對胰島的壓力小于50Pa；

從容器的上部到底部將梯度分入到兩個或多個收集容器中；

選擇含有胰島的收集容器；并且

從梯度中分離胰島。

16.權利要求15所述的方法，其中所述梯度和所述包含胰島的溶液用稀釋溶液封頂。

17.權利要求15所述的方法，其中所述胰島是頂部裝載的并且其中所述梯度包含：

在容器底部的高密度第一層，

在高密度第一層上的包含連續的密度梯度的第二層，

在第二層上的第三層，該第三層包含含有胰島消化物的低密度溶液；和

在第三層上的包含一種稀釋溶液的第四層。

18.權利要求15所述的方法，其中所述胰島是底部裝載的并且其中所述梯度包含：

在容器底部的含有胰島消化物的高密度第一層；

在第一層上的包含連續的密度梯度的第二層；和

包含稀釋溶液的第三層。