[發明專利]用于多肽重組表達的基于T7雙啟動子的載體系統

無效

• 申請號: 200980152893.9
• 申請日: 2009-10-29
• 公開（公告）號: CN102264905A
• 公開（公告）日: 2011-11-30
• 發明（設計）人: 張佑明
• 申請（專利權）人: 基因橋有限責任公司
• 主分類號: C12N15/73
• 分類號: C12N15/73
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 王旭

1.用于寬泛宿主范圍的可誘導表達目的多肽的雙載體系統，所述雙載體系統包括：

i).第一載體，其包括：

(a)位于可誘導的啟動子的5’的T7啟動子；

(b)位于可誘導的啟動子的3’的克隆位點，其用于插入編碼所述目的多肽的基因；和

ii).使得宿主細胞能夠進行T7?RNA聚合酶表達的第二載體，其中所述載體包括處于可誘導的啟動子控制之下的編碼所述T7RNA聚合酶的基因。

2.根據權利要求1的系統，其中在所述第一和/或第二載體中的所述可誘導的啟動子是四環素誘導啟動子Ptet。

3.根據權利要求1或權利要求2的系統，其中所述第二載體另外包含可去除的選擇基因和在宿主細胞中無功能的復制起點。

4.根據權利要求1-3中任一項的系統，其中所述第二載體包含盒：oriR6K-loxP*-genta-loxP*-tetR-Ptet-T7RNApol，其位于由轉座酶識別的兩個反向重復區之間。

5.根據權利要求1-4中任一項的系統，其中所述第一載體包含位于所述克隆位點3’的T7終止子序列。

6.根據權利要求1-5中任一項的系統，其中所述第一載體包含已經插入到所述克隆位點的目的多肽。

7.根據權利要求6的系統，其中所述目的多肽與內含體蛋白融合。

8.根據權利要求7的系統，其中所述內含體蛋白是光桿狀菌屬(Photorhabdus)CipB或來自蘇云金芽孢桿菌(Bacillus?thuringiensis)的晶體蛋白。

9.根據權利要求7或權利要求8的系統，其中所述目的多肽通過Asp-Pro二肽接頭與所述內含體蛋白融合。

10.根據權利要求1-9中任一項的系統，其中所述目的多肽是對宿主細胞有毒性的多肽。

11.根據權利要求10的系統，其中所述目的多肽是抗微生物多肽。

12.一種試劑盒，其包含按照前述權利要求中任一項的第一載體和第二載體。

13.用于表達目的多肽的方法，所述方法包括：

i.用權利要求1-11中任一項所述的第一載體轉化原核宿主細胞，其中所述宿主細胞包含處于可誘導的啟動子控制下的T7?RNA聚合酶；和

ii為所述宿主細胞提供所述可誘導的啟動子的誘導物。

14.根據權利要求13的方法，其中所述原核宿主細胞選自大腸桿菌(E.coli)K12，大腸桿菌Nissle?1917，光桿狀菌屬，假單胞菌屬(Pseudomonas)，土壤桿菌屬(Agrobacterium)，粘球菌屬(Myxococcus)和伯克霍爾德氏菌屬(Burkholderia)。

15.按照權利要求13或14的方法，其還包括純化包含融合蛋白的內含體，并且裂解可裂解的接頭以釋放目的多肽。

16.一種抗微生物肽，其具有序列：PAWFKCWRWQWRWKKLGA。

17.一種用于治療或預防小豬中的細菌感染的方法，其包括施用GB-LfcinB或GB-天蠶素P1。

18.一種用于治療或預防魚類中的細菌感染的方法，其包括向所述魚類游動的水中添加通過按照權利要求13-15中任一項的方法產生的AMPs。