[發明專利]在樣品中檢測目標核酸的方法

無效

• 申請號: 200980151702.7
• 申請日: 2009-12-17
• 公開（公告）號: CN102257163A
• 公開（公告）日: 2011-11-23
• 發明（設計）人: N.牛頓
• 申請（專利權）人: 霍夫曼－拉羅奇有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 權陸軍;郭文潔

1.一種在樣品中檢測目標核酸的方法，包括：

a)?在第一和第二寡核苷酸探針與所述目標核酸選擇性雜交的條件下把所述樣品與基本上缺少5'-3'核酸酶活性的核酸聚合酶以及第一和第二寡核苷酸探針接觸，其中第一寡核苷酸探針包括熒光報道分子而第二寡核苷酸探針包括猝滅劑以便當第一和第二寡核苷酸探針與目標核酸雜交時熒光報道分子的熒光被猝滅劑猝滅以及當第一和第二寡核苷酸沒有與目標核酸雜交時熒光報道分子的熒光不被猝滅劑猝滅，

b)?用光源激發熒光報道分子，

c)?在第一和第二寡核苷酸探針與目標核酸雜交的條件下監測熒光報道分子的熒光，和

d)?將步驟c)的熒光與在第一和第二寡核苷酸探針不與目標核酸雜交的條件下獲得的熒光比較。

2.根據權利要求1的方法，其中至少2對寡核苷酸探針被用于多路測定。

3.根據權利要求1的方法，其中報道分子選自熒光素染料、羅丹明染料、花青染料、FAM、JOE、R6G、TAMRA、ROX、DABCYL、Cy3、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、Cy7和EDANS。

4.根據權利要求1的方法，其中猝滅劑選自熒光素染料、羅丹明染料、花青染料、FAM、JOE、R6G、TAMRA、ROX、DABCYL、Cy3、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、Cy7和EDANS。

5.根據權利要求1的方法，其中猝滅劑是暗猝滅劑。

6.根據權利要求1的方法，其中基本上缺少5'-3'核酸酶活性的核酸聚合酶來源于選自水生棲熱菌、棲熱菌屬物種?sps17、棲熱菌屬物種?Z05、海棲熱袍菌和Thermus?africanus的一種或更多種物種。

7.一種在樣品中檢測目標核酸的試劑盒，包括：

-???包括熒光報道分子的第一寡核苷酸探針，

-???包括猝滅劑的第二寡核苷酸探針，當第一和第二寡核苷酸探針與目標核酸雜交時該猝滅劑有效猝滅熒光報道分子的熒光，和

-???基本上缺少5'-3'核酸酶活性的核酸聚合酶。

8.根據權利要求7的試劑盒，其中報道分子選自熒光素染料、羅丹明染料、花青染料、FAM、JOE、R6G、TAMRA、ROX、DABCYL、Cy3、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、Cy7和EDANS。

9.根據權利要求7的試劑盒，其中猝滅劑選自熒光素染料、羅丹明染料、花青染料、FAM、JOE、R6G、TAMRA、ROX、DABCYL、Cy3、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、Cy7和EDANS。

10.根據權利要求7的試劑盒，其中猝滅劑是暗猝滅劑。

11.根據權利要求7的試劑盒，其中基本上缺少5'-3'核酸酶活性的核酸聚合酶來源于選自水生棲熱菌、棲熱菌屬物種?sps17、棲熱菌屬物種?Z05、海棲熱袍菌和Thermus?africanus的一種或更多種物種。

12.一種反應混合物，包括：

-???樣品中的目標核酸，

-???基本上缺少5'-3'核酸酶活性的核酸聚合酶，

-???包括熒光報道分子的第一寡核苷酸探針，和

-???包括猝滅劑的第二寡核苷酸探針，當第一和第二寡核苷酸探針與目標核酸雜交時該猝滅劑有效猝滅熒光報道分子的熒光。

13.根據權利要求12的反應混合物，其中報道分子選自熒光素染料、羅丹明染料、花青染料、FAM、JOE、R6G、TAMRA、ROX、DABCYL、Cy3、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、Cy7和EDANS。

14.根據權利要求12的反應混合物，其中猝滅劑選自熒光素染料、羅丹明染料、花青染料、FAM、JOE、R6G、TAMRA、ROX、DABCYL、Cy3、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、Cy7和EDANS。

15.根據權利要求12的反應混合物，其中猝滅劑是暗猝滅劑。

16.根據權利要求12的反應混合物，其中基本上缺少5'-3'核酸酶活性的核酸聚合酶來源于選自水生棲熱菌、棲熱菌屬物種?sps17、棲熱菌屬物種?Z05、海棲熱袍菌和Thermus?africanus的一種或更多種物種。