[發明專利]抑制基因表達的短發卡RNA

無效

• 申請號: 200980149189.8
• 申請日: 2009-10-14
• 公開（公告）號: CN102245772A
• 公開（公告）日: 2011-11-16
• 發明（設計）人: 葛青;B·H·約翰斯頓;S·A·卡扎科夫;H·伊爾韋斯;A·達拉斯
• 申請（專利權）人: 索馬根尼科斯公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/63;C12N15/867;A61K48/00;A61P31/14
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 黃革生;隗永良

關于聯邦贊助的發展研究的聲明

本發明在工作過程中部分得到來自國立衛生研究院的NIH資助R44AI056611(BHJ)的支持而完成。政府可享有本發明的某些權利。?

技術領域

本發明涉及利用短發卡RNA(shRNA)抑制病毒基因表達，例如丙肝病毒IRES介導的基因表達。?

背景技術

RNA干擾(RNAi)是利用雙鏈RNA(dsRNA)靶向信使RNA(mRNA)使其降解和減少翻譯的細胞過程。該過程是基因特異性的，允許靶序列的微小變化，并且可以進行多基因靶向。該現象于1990年在植物中首次報道(Napoli，C.等，Introduction?of?a?chimeric?chalcone?synthase?gene?intopetunia?results?in?reversible?co-suppression?of?homologous?genes?in?trans.PlantCell，1990，2(4)：279-289)。隨后在其他生物體中也觀察到該現象，包括真菌和蠕蟲(Romano，N.等，Quelling：transient?inactivation?of?gene?expression?inNeurospora?crassa?by?transformation?with?homologous?sequences.Mol.Microbiol.，1992，6(22)：3343-53)。長的dsRNA可以機械地被Dicer(一種III型RNase)切割成為短干擾RNA(siRNA)，隨后，這些小的雙鏈結構與RNA誘導的沉默復合體(RISC)相互作用，所述RISC是含有解旋酶和核酸內切酶活性的多亞基復合體，介導同源轉錄子的降解。～19-29bp的合成siRNA可以有效地抑制哺乳動物細胞和哺乳動物中的基因表達，這一發現引起開發這些抑制物用作治療的一陣研究(Elbashir，S.M.等，Duplexesof?21-nucleotide?RNAs?mediate?RNA?interference?in?cultured?mammalian?cells.?Nature，2001，411(6836)：494-8)。最近先進的siRNA選擇方法的開發(包括基于運算的合理設計選擇)使得研究人員能夠利用關鍵序列和熱動力學參數選擇有效的靶序列非依賴性siRNA雙鏈(Khvorova，A.等，FunctionalsiRNAs?and?miRNAs?exhibit?strand?bias.Cell，2003，115(1)：209-216)。?

化學合成或者由細菌噬菌體(例如T7、T3或者SP6)或哺乳動物啟動子(pol?III例如U6或者H1或者pol?II)表達的19-29bp小發卡RNA(shRNA)也顯示出對哺乳動物細胞中靶基因的強烈抑制作用。此外，具有單分子結構的合成shRNA比包含兩條鏈的siRNA在效力和簡單性方面具有優勢，所述siRNA需要精確化學量之兩條分離鏈的仔細退火，其可能產生不同的純度譜和脫靶效應(Siolas，D.等，Synthetic?shRNAs?as?potentRNAi?triggers.Nature?Biotechnology，2005，23(2)：227-231；Vlassov，A.V.等，shRNAs?targeting?hepatitis?C：effects?of?sequence?and?structural?features，andcomparison?with?siRNA.Oligonucleotides，2007，17：223-236)。?