[發(fā)明專(zhuān)利]核酸定量的產(chǎn)品和方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200980148025.3
• 申請(qǐng)日: 2009-11-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102224259A
• 公開(kāi)（公告）日: 2011-10-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: C·R·坎托
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 塞昆納姆股份有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/68;C12N15/10
• 代理公司: 上海專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 余穎

1.一種定量分析生物樣品中目標(biāo)核酸含量的方法，包括：

a.在目標(biāo)與其對(duì)應(yīng)物雜交的條件下，

通過(guò)將(i)生物樣品中的多種目標(biāo)核酸(目標(biāo))與(ii)已知量的各目標(biāo)的對(duì)應(yīng)物核酸(對(duì)應(yīng)物)接觸來(lái)制備混合物，

其中各對(duì)應(yīng)物包含(i)與其目標(biāo)基本相同的核苷酸序列和(ii)區(qū)分各對(duì)應(yīng)物與其目標(biāo)的特征；

b.壓縮混合物中目標(biāo)的動(dòng)態(tài)范圍；

c.測(cè)定各目標(biāo)和對(duì)應(yīng)物的量；和

d.通過(guò)(c)所得的量定量各目標(biāo)的含量。

2.一種鑒定生物樣品中目標(biāo)核酸的方法，包括：

a.在目標(biāo)與其對(duì)應(yīng)物雜交的條件下，

通過(guò)將(i)生物樣品中的多種目標(biāo)核酸(目標(biāo))與(ii)已知量的各目標(biāo)的對(duì)應(yīng)物核酸(對(duì)應(yīng)物)接觸來(lái)制備混合物，

其中各對(duì)應(yīng)物包含(i)與其目標(biāo)基本相同的核苷酸序列和(ii)區(qū)分各對(duì)應(yīng)物與其目標(biāo)的特征；

b.壓縮混合物中目標(biāo)的動(dòng)態(tài)范圍；和

c.鑒定各目標(biāo)和對(duì)應(yīng)物。

3.一種壓縮生物樣品中目標(biāo)核酸的動(dòng)態(tài)范圍的方法，包括：

a.在目標(biāo)與其對(duì)應(yīng)物雜交的條件下，

通過(guò)將(i)生物樣品中的多種目標(biāo)核酸(目標(biāo))與(ii)已知量的各目標(biāo)的對(duì)應(yīng)物核酸(對(duì)應(yīng)物)接觸來(lái)制備混合物，

其中各對(duì)應(yīng)物包含(i)與其目標(biāo)基本相同的核苷酸序列和(ii)區(qū)分各對(duì)應(yīng)物與其目標(biāo)的特征；

b.將混合物與一組捕獲核酸接觸，其中(i)該組中的各捕獲核酸與一種目標(biāo)與對(duì)應(yīng)物特異性地雜交，(ii)該組中的各捕獲核酸與其特異性雜交的目標(biāo)和對(duì)應(yīng)物的雜交強(qiáng)度基本相同，且(iii)各捕獲核酸的量低于生物樣品中目標(biāo)的最高含量；

從而目標(biāo)的動(dòng)態(tài)范圍得到壓縮。

4.如權(quán)利要求1、2和3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述目標(biāo)和對(duì)應(yīng)物在(b)之前擴(kuò)增。

5.如權(quán)利要求1、2和3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述目標(biāo)和對(duì)應(yīng)物在(b)之后擴(kuò)增。

6.如上述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述對(duì)應(yīng)物的特征是，在與目標(biāo)基本相同的序列中有單個(gè)核苷酸取代。

7.如上述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述對(duì)應(yīng)物的特征是，在與目標(biāo)基本相同的序列上附加一個(gè)或多個(gè)額外核苷酸。

8.如上述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述各目標(biāo)的量與其對(duì)應(yīng)物的量的比例在約1∶10到約10∶1之間。

9.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述步驟(b)包括將混合物與一組捕獲劑接觸，其中：

各捕獲劑特異性捕獲各目標(biāo)及其對(duì)應(yīng)物，并且

各捕獲劑的含量在壓縮混合物中目標(biāo)的動(dòng)態(tài)范圍的范圍內(nèi)。

10.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述捕獲劑的陣列位于固相載體上。

11.如權(quán)利要求9或10所述的方法，其特征在于，所述捕獲劑以基本相同的親和力與目標(biāo)和對(duì)應(yīng)物相互作用。

12.如權(quán)利要求9、10或11中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述各捕獲劑是包含與目標(biāo)的核苷酸序列互補(bǔ)的多核苷酸序列的捕獲核酸。

13.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，目標(biāo)-捕獲劑的解鏈溫度(Tm)與對(duì)應(yīng)物-捕獲劑的Tm的差異低于或等于1攝氏度。

14.如權(quán)利要求9-13中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述陣列的任何兩種捕獲劑的含量相差低于或等于50％。

15.如權(quán)利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述目標(biāo)序列在隨后確定。

16.如權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于，所述目標(biāo)序列通過(guò)用納米孔裝置分析目標(biāo)確定。

17.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，在(b)之后將對(duì)應(yīng)物與目標(biāo)分離。

18.如權(quán)利要求17所述的方法，其特征在于，所述對(duì)應(yīng)物或目標(biāo)包含與捕獲劑結(jié)合的捕獲部分。

19.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法包括在(b)之后將對(duì)應(yīng)物與目標(biāo)分離。