[發明專利]膽色素原脫氨酶基因治療

有效

• 申請號: 200980147755.1
• 申請日: 2009-09-29
• 公開（公告）號: CN102227500A
• 公開（公告）日: 2011-10-26
• 發明（設計）人: A·豐塔內利亞斯羅馬;G·岡薩雷斯阿薩吉諾拉薩;M·S·羅德里格斯培尼亞;M·A·帕內達羅德里格斯;J·特威斯克;J·M·普列托巴爾圖埃納;H·彼得里;S·J·H·范德芬特
• 申請（專利權）人: 阿姆斯特丹分子治療(AMT)有限公司;頂端生物醫藥項目公司
• 主分類號: C12N9/88
• 分類號: C12N9/88;C12N15/09;C12N15/864
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司 72002
• 代理人: 左路;林曉紅

發明領域

本發明涉及編碼人膽色素原脫氨酶的核苷酸序列和攜帶這些序列的核酸構建體。本發明還涉及新的基因治療載體以及使用所述載體治療和預防膽色素原脫氨酶缺乏所引起的疾病狀況的方法。更具體而言，本發明的基因治療載體可以用于緩解包括急性間歇性卟啉病在內的這類疾病狀況的癥狀的方法。

發明背景

急性間歇性卟啉病(AIP)是遺傳代謝病，其特征為膽色素原脫氨酶(PBGD)即血紅素合成途徑的第三個酶缺乏。該酶的活性在繼承該遺傳性狀的人中為正常活性的約50％該疾病以常染色體顯性方式遺傳，并且是最常見的急性卟啉病。盡管其發生于所有的種族中，但是其在北歐最流行，主要在瑞典、英國和愛爾蘭。在美國和其他國家，估計的流行程度為5/100000，在瑞典北部高達60-100/100000。目前，PBGD基因中超過225個突變已有描述。顯性臨床特征為由于神經系統功能障礙導致的急性間歇性發作，包括腹部疼痛、腦脊髓交感神經系統障礙和循環障礙。腹部疼痛已在85-95％的病例中有報道，并且是最常見的特征，隨后是神經變化或與神經變化有關。如果AIP未被識別到，且未撤回有害藥物，如可以促使發作發生的肝細胞色素P450酶所代謝的藥物，就會發生向呼吸麻痹和延髓麻痹以及死亡的進展。由于心律失常，還可以發生突然死亡。也會發生原發性肝癌和腎功能受損。

PBGD的遺傳缺乏不足以出現癥狀。繼承PBGD突變的高比例的個體從未發展卟啉病癥狀，即臨床外顯率很低。AIP攜帶者的臨床癥狀與卟啉前體△-氨基乙酰丙酸(ALA)和膽色素原(PBG)的產生和分泌增加(由于激發急性發作的藥物或其他誘發因素導致血紅素合成要求增加)有關。在這些情況中，PBGD缺乏限制了血紅素合成，結果血紅素介導的ALA合成酶(ALAS1)抑制受到削弱。有證據表面，肝是過量卟啉前體的主要來源。這些化合物在傾向于重復卟啉病危險期的那些人的發作中升高，并在危險期中進一步增加。如果疾病長時期保持無活性，它們可以降低至正常。

急性發作經常在青春期后發生，并且可以通過內分泌因素和類固醇激素以及多種環境因素在潛伏的個體中誘發，包括藥物、營養因素、受限的碳水化合物和熱量攝取、抽煙、類固醇激素和口服避孕藥、鉛中毒、并發感染、外科手術以及心理壓力。藥物是最重要的促使急性發作發生的因素，并且安全藥物名錄可在www.drugs-porphyria.com中獲得。抽煙、酒精以及為CYP450所代謝的藥物極大地增加了肝血紅素需求并導致ALAS1誘導，ALAS1增加卟啉前體的產生并促使急性發作發生。同樣，ALAS1受在禁食期在肝中被誘導的過氧化物酶體增生物激活受體γ共激活劑1α(PGC1α)的正向調節。在誘發因素中，類固醇激素看起來發揮重要作用。這一概念受到疾病很少在青春期前表現出來以及口服避孕藥在一些患有PBGD缺乏的女性中使發作加劇這一事實的支持。同樣，女性感染(80％)比男性感染(20％)更頻繁。

急性發作用輸注葡萄糖和氯高鐵血紅素治療(Normosang，Orphan?Europe)。葡萄糖看起來拮抗PGC-1α所介導的ALAS1誘導。氯高鐵血紅素恢復調節血紅素庫并抑制肝ALAS1誘導。一些女性發展了可通過促性腺素釋放素(GnRH)類似物預防的經期前發作。一些患者表現出復發的急性發作和嚴重的致殘性神經功能障礙(disabling?neurological?dysfunction)。晚期神經損傷和亞急性和慢性癥狀對血紅素治療無應答。這是僅能通過異源肝移植治愈的威脅生命的疾病狀況，異源肝移植目前在3名患者中阻止了神經毒性ALA和PBG累積。然而，肝移植可獲得的相容供體有限和具有顯著的發病率和死亡率。

因此，基因替代治療在除了PBGD缺乏肝功能完全正常的患者中是肝移植的潛在可選方案。基因治療是通過使用載體將特定基因導入細胞來控制疾病的方法。旨在校正肝酶缺陷的基因送遞治療的可行性正在AIP(AIP小鼠)實驗模型中研究。腺病毒載體介導的PBGD向卟啉病小鼠的基因轉移，由于PBGD的短暫肝表達而表現出短期治療功效(Johansson，2004，Mol.Ther.10(2)：337-43)。這些結果建立了原理驗證(proof-of-principle)，表明病毒載體介導的PBGD基因送遞可以在AIP小鼠中短暫地緩解苯巴比妥誘發的卟啉病發作的嚴重表現。

EP?1?049?487僅在概念水平上公開了含有人BGD?cDNA的rAAV載體的構建。

然而，本領域仍然需要用于AAV介導的向有需要的對象送遞hPBGD的改善的載體和方案。

發明概述