[發明專利]產生腺病毒載體的方法

有效

• 申請號: 200980143895.1
• 申請日: 2009-10-29
• 公開（公告）號: CN102203242A
• 公開（公告）日: 2011-09-28
• 發明（設計）人: A·魯伊琴斯;J·A·劉易斯
• 申請（專利權）人: 克魯塞爾荷蘭公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12M3/06;C12N15/861
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司 72002
• 代理人: 左路;林曉紅

1.一種產生重組腺病毒血清型35(rAd35)的方法，所述方法包括：

a)用灌注系統懸浮培養生產細胞；

b)用rAd35感染其密度為10x10⁶個存活細胞/mL至16x10⁶個存活細胞/mL之間的所述細胞；

c)用灌注系統進一步培養感染的細胞以使所述rAd35增殖；和

d)收獲所述rAd35。

2.權利要求1的方法，其中用rAd35感染其密度為大約10x10⁶至14x10⁶個存活細胞/mL之間的步驟b)中的所述細胞。

3.前述任一項權利要求的方法，其中步驟c)中所述灌注系統是交替切向流(ATF)灌注系統。

4.前述任一項權利要求的方法，進一步包括：

e)純化所述rAd35，及任選

f)制備含有所述純化的rAd35的藥物組合物。

5.前述任一項權利要求的方法，其中所述重組腺病毒缺少至少一部分E1區，并且包含異源核酸。

6.前述任一項權利要求的方法，其中步驟a)中所述灌注系統是交替切向流(ATF)灌注系統。

7.前述任一項權利要求的方法，其中步驟a)在第一生物反應器中進行，步驟b)和c)在第二生物反應器中進行。

8.前述權利要求任一項的方法，其中產生的rAd35的物理顆粒與感染性顆粒的比率(VP/IU)低于30∶1，優選低于20∶1。

9.一種生物反應器，其包含培養基、生產細胞和病毒顆粒，其中所述生物反應器的工作體積在2L-1000L之間，優選在50L-500L之間，且特征在于所述生物反應器包含至少1x10¹²個rAd35病毒顆粒(VP)/mL。

10.權利要求9的生物反應器，其與ATF灌注系統連接。

11.權利要求9或10的生物反應器，其中所述rAd35病毒顆粒的VP/IU比率低于30∶1，優選低于20∶1。

12.一種產生至少1x10¹²個rAd35病毒顆粒(VP)/mL的方法，所述方法包括：

a)用灌注系統懸浮培養生產細胞；

b)用rAd35感染其密度為10x10⁶個存活細胞/mL至16x10⁶個存活細胞/mL之間的所述細胞；

c)用灌注系統進一步培養感染的細胞以使所述rAd35增殖，從而rAd35病毒顆粒的濃度達到至少1x10¹²個VP/mL；以及

d)收獲所述rAd35。