[發(fā)明專利]利用光譜分離，表征和/或標(biāo)識微生物的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200980143430.6
• 申請日: 2009-10-30
• 公開（公告）號: CN102203588A
• 公開（公告）日: 2011-09-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 約翰·沃爾什;瓊斯·海曼;瑟曼·索普;布拉德福德·克萊;克里斯多夫·羅恩斯克
• 申請（專利權(quán)）人: 生物梅里埃公司
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65;C12M1/12;C12M1/34;G01N21/64
• 代理公司: 北京市德恒律師事務(wù)所 11306
• 代理人: 陸鑫;高雪琴

1.一種從測試樣品中表征和/或鑒定標(biāo)識微生物的方法，包括：

(a)獲得已知包含或可能包含微生物的測試樣品；

(b)選擇性地溶解所述測試樣品中的非微生物細(xì)胞以產(chǎn)生溶解的樣品；

(c)將微生物與所述溶解樣品的其它組分分離以形成微生物的分離樣品；

(d)利用光譜探詢所述分離的微生物以產(chǎn)生所述微生物的光譜測定結(jié)果；和

(e)通過比較所述光譜測定結(jié)果與已知的微生物所取得的光譜測定結(jié)果，或預(yù)測的光譜性質(zhì)表征和/或標(biāo)識所述分離的樣品中的所述微生物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟(c)和(d)在密閉容器中實(shí)施而其中所述探詢步驟(d)是非侵入性的。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述光譜測定結(jié)果源自熒光光譜和拉曼光譜。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述光譜選自由熒光光譜，漫反射光譜，吸收和透射光譜，紅外光譜，太赫茲光譜，及其任意組合組成的組。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中熒光光譜以正面模式進(jìn)行測定。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中標(biāo)識基于所述微生物的內(nèi)源熒光。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中所述光譜包括測定激發(fā)-發(fā)射矩陣(EEM)。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述EEM與已知微生物的EEM數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比較。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述微生物基于一種或多種表型特性和/或形態(tài)學(xué)特性進(jìn)行表征。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述微生物基于檢測時(shí)間，生長速率和微生物顆粒粒徑，形狀，顏色和/或密度中的一種或多種測定結(jié)果進(jìn)行表征。

11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述微生物表征到一種或多種選自由革蘭氏組，臨床革蘭氏組，治療組，功能組和天然內(nèi)源熒光組組成的組的分類模型中。

12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述微生物標(biāo)識至屬的水平，種的水平，或菌株水平。

13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述選擇性的溶解步驟(b)通過超聲波溶解，滲透壓震擾，化學(xué)處理，或其組合實(shí)施。

14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述選擇性的溶解步驟(b)采用包含一種或多種清潔劑的溶胞溶液實(shí)施。

15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述一種或多種清潔劑選自由TritonX-100，TritonX-100-R，TritonX-114，NP-40，GenapolC-100，GenapolX-100，IgepalCA?630，Arlasolve^TM200，Brij96/97，CHAPS，辛基β-D-葡萄糖苷，皂素，九乙二醇單十二烷基醚(C12E9，聚桂醇)，十二烷基硫酸鈉，N-月桂酰肌氨酸，脫氧膽酸鈉，膽汁鹽，十六烷基三甲基溴化銨，SB3-10，SB3-12，氨磺酰基甜菜堿(amidosulfobetaine)-14，C7BzO，Brij98，Brij58，Brij35，Tween80，Tween20，PluronicL64，PluronicP84，非清潔劑磺基甜菜堿(NDSB?201)，氯胺苯醇(PMAL-C8)，以及甲基-β-環(huán)糊精組成的組。

16.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述清潔劑是包含結(jié)構(gòu)C_12-18/E_9-10的聚氧乙烯清潔劑。

17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中，所述聚氧乙烯清潔劑選自由Brij97，Brij96V，GenapolC-100，GenapolX-IOO和聚桂醇組成的組。

18.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中，所述溶胞溶液進(jìn)一步包含一種或多種酶，所述一種或多種酶包含一種或多種蛋白酶和一種或多種核酸酶的混合物。

19.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述溶胞溶液包含一種或多種緩沖劑。

20.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述分離步驟(c)是過濾實(shí)現(xiàn)的，而所述過濾產(chǎn)生分離的微生物樣品。