[發明專利]利用內部校正定量檢測RNA

無效

• 申請號: 200980142616.X
• 申請日: 2009-10-22
• 公開（公告）號: CN102203289A
• 公開（公告）日: 2011-09-28
• 發明（設計）人: F·納茲
• 申請（專利權）人: 恰根有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 余穎

1.檢測樣品中一種或多種靶核糖核酸的方法，包括以下步驟：

(i)提供包含所述一種或多種靶核糖核酸的樣品；

(ii)在允許所述染料與所述樣品中一種或多種核糖核酸結合的條件下，使所述樣品與核糖核酸特異性熒光染料接觸；

(iii)測定所述樣品中所述RNA-結合染料的熒光；

(iv)將所述測得的熒光與樣品中的RNA總量相關聯；

(v)逆轉錄所述一種或多種核糖核酸，從而產生雙鏈核酸；

(vi)擴增所述一種或多種產生的雙鏈核酸，其中在擴增期間和/或之后，在允許一種或多種探針與樣品中產生的所述一種或多種雙鏈核酸結合的條件下，存在所述一種或多種擴增產物的一種或多種特異性熒光探針；

(vii)測定擴增期間和/或之后結合于所述一種或多種擴增產物的所述一種或多種探針的熒光，并把所述測得的熒光與樣品中靶RNA序列的量相關聯；

(viii)按樣品中RNA的總量校正樣品中靶RNA序列的含量。

2.如權利要求1所述方法，其特征在于，其中所述反應在一個反應容器中進行。

3.如權利要求1或2所述方法，其特征在于，其中所述樣品為總RNA制品。

4.如上述權利要求中任一項所述方法，其特征在于，其中所述RNA特異性熒光染料是Quant-iT^TM-RNA試劑。

5.如上述權利要求中任一項所述方法，其特征在于，其中所述DNA特異性熒光探針是雙鏈DNA的異性熒光染料。

6.如權利要求5所述方法，其特征在于，其中所述熒光染料選自下組：SYBR?Green?I、SYTO-9、SYTO-13、SYTO-16、SYTO-64、SYTO-82、YO-PRO-1、SYTO-60、SYTO-62、SYTOX橙、SYBR綠I、TO-PRO-3、TOTO-3、POPO-3和BOBO-3。

7.如權利要求1-6中任一項所述方法，其特征在于，其中所述DNA特異性熒光探針是標記有熒光染料的寡核苷酸探針，該寡核苷酸探針與由靶RNA序列所產生的DNA序列基本互補。

8.如權利要求1-7中任一項所述方法，其特征在于，其中定量檢測樣品中的兩種或多種的靶核糖核酸，每種需要定量檢測的靶RNA采用一種標記有不同熒光染料的寡核苷酸探針。

9.如權利要求1-8中任一項所述方法，其特征在于，其中所述擴增反應是聚合酶鏈反應。

10.如權利要求9所述方法，其特征在于，其中所述聚合酶鏈反應是定量實時PCR。

11.定量檢測樣品中靶RNA的試劑盒，其包含：

(i)與RNA特異性結合的熒光染料，

(ii)一種或多種DNA擴增產物的一種或多種特異性熒光探針。

12.RNA特異性熒光染料在按樣品中RNA總量校正樣品中靶RNA序列含量中的應用。

13.如利要求10所述試劑盒在按樣品中RNA總量校正樣品中靶RNA序列含量中的應用。

14.權利要求1-9中任一項所述方法或權利要求10所述試劑盒在基因表達分析中的應用。