[發明專利]多層的血液產品

有效

• 申請號: 200980141866.1
• 申請日: 2009-08-24
• 公開（公告）號: CN102202674A
• 公開（公告）日: 2011-09-28
• 發明（設計）人: R.倫德奎斯特;N.E.霍爾姆
• 申請（專利權）人: 里亞普利克斯有限公司
• 主分類號: A61K35/14
• 分類號: A61K35/14;A61K38/36;A61L24/10;B01L3/14
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 權陸軍;劉健

技術領域

本發明涉及多層的血液產品、制備所述血液產品的方法、可通過所述方法獲得的血液產品以及血液產品制備容器裝置。

背景技術

人類凝血系統能夠止血和啟動愈合。該系統的功能是公知的，被廣泛地研究。然而，凝血產物在啟動愈合方面的重要性僅在近年來被認識到。

血液制品，例如，血纖蛋白密封劑和血小板濃縮物通過從抗凝固的全血中分離富含血小板的血漿（PRP）來生產。血小板和血漿的存在部分地模擬了凝血酶激活時的天然的人類凝結系統。這產生了在血纖蛋白基質中生長促進因子的含血小板的自體濃縮物。這樣的組合物可以用于覆蓋傷口表面，并聲稱能啟動愈合。

David?M.?Dohan等人的Platelet-rich?fibrin（PRF）:?A?second-generation?platelet?concentrate.?Part?I:?Technological?concepts?and?evolution,?Oral?Surg?Oral?Med?Oral?Pathol?Oral?Radiol?Endod?2006;101:E37-44描述了如何不添加任何添加劑或試劑從全血制備富含血小板的固體血纖蛋白網絡。PRF方案是：??在10?mL玻璃管或玻璃包被的塑料中不使用抗凝血劑采集血液樣品，立即在大約400?g離心10分鐘。抗凝血劑的缺乏意味著血液樣品的大多數血小板在與玻璃管壁接觸幾分鐘內激活并釋放凝結級聯物。纖維蛋白原首先在試管的高部濃縮，之后循環的凝血酶將它轉變為血纖蛋白。然后在試管的中部獲得血纖蛋白塊，從試管底部的紅細胞的上部伸出到頂部的非細胞血漿中。血小板在血纖蛋白網眼中大規模地截留。這種技術的成功完全取決于血液采集和轉移到離心機的速度。實際上，在沒有抗凝血劑時，血液樣品在與試管玻璃接觸時幾乎立即開始凝固，其花費最少幾分鐘的離心來將纖維蛋白原濃縮在試管的中部和上部。快速操作是獲得臨床上可用的PRF血塊的唯一方式。如果采集血液和啟動離心所需的時間過長，將產生失敗：血纖蛋白將以彌散的方式在試管中聚合，將僅獲得沒有稠密性的小的血塊。總之，PRF方案使得采集填充了血清和血小板的血纖蛋白塊成為可能。通過從試管中取出血塊，人工地切割紅細胞部分，人工地逐出血纖蛋白基質中截留的流體（血清），醫師將獲得自體的血纖蛋白膜。

然而這種血纖蛋白網絡包括含有紅血細胞的實質部分的紅色血栓，其必需人工地切除。此外，產生的血纖蛋白網絡的成分，例如，血纖蛋白、白細胞和血小板，是任意分布的并且包埋在產品內部。沒有描述在使用低g力下的白細胞回收，白細胞的回收是低的，因為某些白細胞將位于紅細胞部分中。血纖蛋白內細胞的陷網導致這些細胞的缺乏或緩慢的釋放，從而抑制被包括的白細胞的接觸依賴性抗殺微生物潛力。

Dohan等人的“Oral?Surg?Oral?Med?Oral?Pathol?Oral?Radiol?Endod?2006;101:E37-44?and?2006;101:E45-50”描述了一種網絡，其不是一定形狀和結構的血小板濃縮物，其直接適合于覆蓋傷口表面。為了獲得可用于覆蓋傷口表面的形狀和形式/剛性和防止紅血細胞包含，已知的富血小板固體血纖蛋白網絡將必需人工地重塑和壓縮。此外，所述方法包括幾個步驟，不能在一個封閉的系統中制備，因而不便于臨床使用。

Sutton等人的“Cell?separation?in?the?buffy?coat.?Biorheology.?1988;25（4）:663-73”描述了抗凝固全血將如何在離心或被動沉降時分離成幾個層；紅血細胞、白細胞和血小板（=?暗黃覆蓋層）和血漿。進一步的，通過使用10000?g的離心力10分鐘和利用1.053的密度漂浮，暗黃覆蓋層可以通過戊二醛固定，以及取出用于研究；然而，這由于戊二醛的毒性而不能臨床上使用。現有的從抗凝固的血提取暗黃覆蓋層的幾種方法包括利用密度限定的物質（即，Lymphoprep）。除了抗凝固的血的需要之外，提取的細胞將在血漿中懸浮和混合（打亂），血漿將不可避免地被包括。

EP?1637145A?描述了通過薄片狀多孔膜從懸浮液過濾細胞的方法（例如，包括血小板和白細胞的血細胞），將細胞保留在所描述的膜中。薄片狀多孔材料可以從血纖蛋白制備。然而，不能獲得分層的結構，細胞在多孔材料的深部截留，同種異體的血纖蛋白的使用提高了與其他人交叉感染的風險。此外，所述方法包括幾個步驟，不能在一個封閉的系統中制備，因而不便于臨床使用。