[發明專利]小型振蕩瓶培養

無效

• 申請號: 200980139382.3
• 申請日: 2009-10-02
• 公開（公告）號: CN102171360A
• 公開（公告）日: 2011-08-31
• 發明（設計）人: J·克魯茲曼;R·普斯凱勒;C·舒斯特
• 申請（專利權）人: 弗·哈夫曼-拉羅切有限公司
• 主分類號: C12P21/00
• 分類號: C12P21/00;C12M1/36
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 黃革生;安佩東

1.培養哺乳動物細胞的方法，包括根據i)培養基中的活細胞密度改變培養容器的機械運動速度的步驟。

2.根據權利要求1的方法，其特征在于所述改變進一步取決于ii)培養基中的氧分壓。

3.根據權利要求1或2任一項的方法，進一步包括一個或多個如下步驟：

a)培養一套培養容器

-每一個容器的總容積最高為200μl，或

-每一個容器的工作容積最高為100μl，或

-每一個容器的總容積在25ml至3000ml之間，或

-每一個容器的工作容積在10ml至1500ml之間，

b)通過整個培養容器的機械運動來攪動培養基，

c)通過培養容器的外氣相的二氧化碳濃度來調節培養基的pH值。

4.根據前述任一項權利要求的方法，其特征在于通過整個培養容器的旋轉運動或整個培養容器的俯仰運動或整個培養容器的振蕩進行機械運動。

5.根據前述任一項權利要求的方法，進一步包括：

d)通過非侵入性光化學傳感器確定培養容器內的pH值和pO₂。

6.根據前述任一項權利要求的方法，其特征在于機械運動速度的調節如下：

i)根據起始細胞密度將機械運動速度設置為60rpm至100rpm，其中

當細胞密度為1x10⁵細胞/ml或更小時設置為60rpm，

當細胞密度為2.5x10⁵細胞/ml時設置為80rpm，

當細胞密度為5x10⁵細胞/ml時設置為100rpm，

或在中間細胞密度時設置為線性中間值，

ii)活細胞密度每增加一倍，機械運動速度增加20rpm，直至細胞濃度達到20x10⁵細胞/ml，

iii)活細胞密度每增加20x10⁵細胞/ml，機械運動速度增加20rpm，直至細胞密度達到80x10⁵細胞/ml，

iv)活細胞密度由80x10⁵細胞/ml增加至細胞密度100x10⁵細胞/ml時，機械運動速度增加10rpm。

7.根據權利要求6的方法，其特征在于機械運動的速度進一步調節如下：

v)維持機械運動速度在200rpm至210rpm之間，逐步降低機械運動速度至135rpm，并保持該速度不變直到培養完成。

8.根據權利要求7的方法，其特征在于步驟v)中機械運動的速度維持在200rpm至210rpm達18小時至30小時。

9.根據前述任一項權利要求的方法，進一步包括，

e)增加機械運動速度來增加培養基中的氧分壓或降低機械運動速度來降低培養基中的氧分壓。

10.生產異源多肽的方法，包括以下步驟：

a)提供含有編碼所述異源多肽的核酸的哺乳動物細胞，

b)用根據權利要求1-9任一項的方法培養所述哺乳動物細胞，

c)從培養基中回收異源多肽。

11.根據權利要求10的方法，其特征在于異源多肽是免疫球蛋白或免疫球蛋白片段或免疫球蛋白接合物。

12.根據權利要求10或11任一項的方法，其特征在于哺乳動物細胞是CHO細胞、HEK細胞、BHK細胞、NS0細胞、SP2/0細胞或雜交瘤細胞。

13.非侵入性光化學傳感器在權利要求1-9任一項的方法中用于測定小型培養容器中的pH值和pO₂的應用。

14.根據權利要求1-9任一項的方法用于確定在容積為1000l至25000l的攪拌培養容器中的大型培養的培養參數范圍的應用。