[發明專利]尿液中HIV相關蛋白的檢測有效

申請號：	200980139248.3	申請日：	2009-10-05
公開（公告）號：	CN102171574A	公開（公告）日：	2011-08-31
發明（設計）人：	加樂·W·紐曼;麥克·鮑威爾;阿金斯·多赫蒂;張伯倫·奧拜羅;克勞德特·米切爾-阿里;卡里德·巴舍爾;馬福斯·坎	申請（專利權）人：	莫爾豪斯醫學院
主分類號：	G01N33/68	分類號：	G01N33/68;G01N33/493
代理公司：	北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司 11204	代理人：	王達佐;洪欣
地址：	美國佐***	國省代碼：	美國;US
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摘要：
搜索關鍵詞：	尿液 hiv 相關蛋白檢測
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【說明書】：

本申請要求2009年10月2日提交的美國專利申請流水第12/572,652號的優先權，該美國專利申請要求2008年10月6日提交的美國臨時申請流水第61/102,941號的優先權。通過引用將所有上述申請的全文并入本文。

發明領域

本發明通常涉及診斷方法，并且具體而言，涉及使用尿液中的生物標志物來檢測HIV感染、診斷HIV或HIV相關疾病的方法。

背景技術

通常對血清或血漿進行HIV測試。HIV抗體的檢測是HIV-1感染的推定證據，并且通常通過Western印跡方法進行驗證。通過p24抗原測定進行的病毒檢測或通過RT-PCR進行的病毒RNA檢測也用于確定循環中病毒的量。CD4/CD8T細胞比和其他免疫功能測試也常用于監測免疫狀態和向AIDS的進展。最近，還開發了使用唾液或口腔中上皮細胞的HIV測試。然而，目前沒有可用的檢測尿液中抗原或抗體的測試。尿液中HIV蛋白的檢測可以提供檢測HIV感染或疾病進展，特別是腎臟并發癥的更快速的方法。

HIV相關腎病(HIVAN)是尤其困擾非洲人種的腎病，其特征為腎臟肥大和快速進展以及階段性腎病。HIVAN是由HIV-1病毒直接感染腎臟細胞所引起并且通過病毒基因產物而導致腎臟損傷。HIVAN也能夠由HIV感染期間細胞因子釋放的改變所引起。HIVAN的病因學仍然未知。據估算，90％的HIVAN患者是非洲人種，這表明該疾病具有遺傳傾向(Wyatt，CM.，Klotman，P.E.HIV-Associated?Nephropathy?in?the?Era?of?Antiretroviral?Therapy(逆轉錄病毒療法時代的HIV相關腎病).American?Journal?of?Medicine?Review?2007)。

當患者的腎臟活組織切片檢查表現出局灶性節段性腎小球硬化，伴隨腎小管擴張和炎癥、微囊型腎小管、退變的腎小球毛細血管，并聯合明顯的蛋白尿時，可診斷為HIVAN(同上)。然而，該方法是創傷性操作并且因為會造成創傷有時會被患者拒絕。因此，需要對于HIV或HIV相關疾病的可靠、快速、合算和較低創傷性的診斷測試。

發明概述

本發明一方面涉及檢測哺乳動物中HIV感染的方法。在一個實施方案中，該方法包括以下步驟：從所述哺乳動物的尿液樣品中分離外泌體，以及檢測來自所述分離的外泌體的HIV相關生物標志物。

在相關實施方案中，該方法還包括以下步驟：根據所述分離的外泌體中HIV相關生物標志物是否存在來確定該哺乳動物是否被HIV感染。

在相關的實施方案中，通過離心分離外泌體。

在另一相關的實施方案中，通過過濾分離外泌體。

在另一相關實施方案中，通過一種或多種選自以下的技術檢測外泌體：電泳、Western印跡、HPLC、FPLC、MS和蛋白質測序。

在另一相關實施方案中，通過SELDI-TOF-MS和LC-MS/MS檢測外泌體。

在另一相關實施方案中，HIV相關生物標志物選自Nef、HIV包膜gp120、HIV蛋白酶、Vif、Gag-Pol、Gag、p24、Rev、逆轉錄酶(RT)、Tat、p1、p17、Vpu、Vpr、gp41和DNA聚合酶。

在另一相關實施方案中，HIV相關生物標志物是Nef、HIV蛋白酶、Vif、Pol或Gag。

在另一相關實施方案中，HIV相關生物標志物是Nef。

在一個相關實施方案中，哺乳動物是人、猴、大猩猩或狒狒。

在另一相關實施方案中，哺乳動物是人。