[發明專利]尿液中HIV相關蛋白的檢測

有效

• 申請號: 200980139248.3
• 申請日: 2009-10-05
• 公開（公告）號: CN102171574A
• 公開（公告）日: 2011-08-31
• 發明（設計）人: 加樂·W·紐曼;麥克·鮑威爾;阿金斯·多赫蒂;張伯倫·奧拜羅;克勞德特·米切爾-阿里;卡里德·巴舍爾;馬福斯·坎
• 申請（專利權）人: 莫爾豪斯醫學院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/493
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司 11204
• 代理人: 王達佐;洪欣

1.檢測哺乳動物中HIV感染的方法，包括：

從所述哺乳動物的尿液樣品分離外泌體；和

檢測分離的外泌體中的HIV相關生物標志物。

2.如權利要求1所述的方法，還包括：

根據所述分離的外泌體中HIV相關生物標志物是否存在來確定所述哺乳動物是否被HIV感染。

3.如權利要求1所述的方法，其中所述HIV相關生物標志物選自Nef、HIV包膜gp120、HIV蛋白酶、Vif、Gag-Pol、Gag、p24、Rev、逆轉錄酶(RT)、Tat、p1、p17、Vpu、Vpr、gp41和DNA聚合酶。

4.如權利要求3所述的方法，其中所述HIV相關生物標志物是Nef、HIV蛋白酶、Vif、Pol或Gag。

5.如權利要求4所述的方法，其中所述HIV相關生物標志物是Nef。

6.如權利要求1所述的方法，其中通過離心分離所述外泌體。

7.如權利要求6所述的方法，其中通過將所述尿液樣品以100,000g或更高速離心15-120分鐘來分離所述外泌體。

8.如權利要求6所述的方法，其中通過將所述尿液樣品以100,000g離心30-90分鐘來分離所述外泌體。

9.如權利要求6所述的方法，其中通過將所述尿液樣品以100,000g離心60分鐘來分離所述外泌體。

10.如權利要求6所述的方法，其中通過以下步驟分離所述外泌體：將所述尿液樣品以5,000-25,000g離心5-30分鐘，將上清轉移至另一管，將轉移的上清以100,000g離心15-120分鐘。

11.如權利要求6所述的方法，其中通過以下步驟分離所述外泌體：將所述尿液樣品以20,000-22,000g離心15分鐘，將上清轉移至另一管，將轉移的上清以100,000g離心30-90分鐘。

12.如權利要求1所述的方法，其中通過過濾分離所述外泌體。

13.如權利要求12所述的方法，其中通過使用分子量截留值為約500kd至約50kd的離心濾器進行過濾來分離所述外泌體。

14.如權利要求12所述的方法，其中通過使用分子量截留值為約100kd的離心濾器進行過濾來分離所述外泌體。

15.如權利要求1所述的方法，其中通過一種或多種選自以下的技術檢測所述HIV相關生物標志物：電泳、Western印跡、HPLC、FPLC、質譜(MS)和蛋白質測序。

16.如權利要求8所述的方法，其中通過SELDI-TOF-MS或LC-MS/MS檢測所述HIV相關生物標志物。

17.如權利要求1所述的方法，其中所述哺乳動物是人、猴、大猩猩或狒狒。

18.如權利要求17所述的方法，其中所述哺乳動物是人。

19.診斷哺乳動物中HIV相關疾病的方法，包括：

從所述哺乳動物的尿液樣品分離外泌體；和

檢測分離的外泌體中的HIV相關生物標志物。

20.如權利要求19所述的方法，其中所述HIV相關疾病是HIV相關腎病。

21.如權利要求19所述的方法，還包括：

根據分離的外泌體中所述HIV相關生物標志物是否存在來確定所述哺乳動物是否患有HIV相關腎病。

22.如權利要求19所述的方法，其中所述哺乳動物是人。

23.如權利要求19所述的方法，其中通過超速離心或過濾分離所述外泌體。

24.如權利要求19所述的方法，其中所述HIV相關生物標志物選自Nef、HIV包膜gp120、HIV蛋白酶、Vif、Gag-Pol、Gag、p24、Rev、逆轉錄酶(RT)、Tat、p1、p17、Vpu、Vpr、gp41和DNA聚合酶。

25.如權利要求19所述的方法，其中所述HIV相關生物標志物是Nef、HIV蛋白酶、Vif、Pol或Gag。