[發明專利]由超產酵母生產角鯊烯

有效

• 申請號: 200980139111.8
• 申請日: 2009-08-28
• 公開（公告）號: CN102257149A
• 公開（公告）日: 2011-11-23
• 發明（設計）人: M·布魯克
• 申請（專利權）人: 諾華有限公司
• 主分類號: C12P5/02
• 分類號: C12P5/02
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 余穎

本申請要求基于美國臨時申請61/190,486的全部權利，并將其全部內容通過引用納入本申請。

技術領域

本發明涉及角鯊烯的生產，角鯊烯可以用于，例如，水包油乳液。

背景技術

鯊魚肝油含有一種稱為角鯊烯的支鏈、不飽和類萜，2，6，10，15，19，23-六甲基-2，6，10，14，18，22-二十四碳己烯。角鯊烯被用于人用疫苗的水包油乳液，例如用作流感疫苗佐劑的MF59乳液。角鯊烯還可用于其他藥品(例如膏劑、栓劑等)和化妝品。

目前角鯊烯的來源主要是魚油，尤其是鯊魚肝油。采用提取自鯊魚肝油的角鯊烯會有一些問題，尤其是，如果沒有堅持嚴格的生產標準(例如諾華(Novartis)在MF59生產過程中采用的標準)。例如，鯊魚會被某些病原體感染，而這些病原體可能同樣會感染人或產生某些對人有害的物質，還可能有TSE或TSE樣鯊源物質存在[參考文獻1-3]。并且，鯊魚可能含有對人有害的毒素，例如毒素carchatoxin。因此，低價、低端的角鯊烯源不適合用于制造人用藥。當角鯊烯是免疫佐劑的組成部分時，這些有害風險可能更嚴重，因為，根據佐劑的定義，它可能誘導針對雜質的強烈的副反應。

所以，藥用角鯊烯(例如用于制造MF59)不能采用低價、低端鯊魚角鯊烯，而需采用高級別的原材料，但這些高質角鯊烯十分昂貴，且來源有限。如此昂貴的來源是不適用的，例如對發展中國家而言。

需要找到一種既能滿足藥用高標準又不那么貴的角鯊烯來源。所以，需要新的角鯊烯來源，尤其是對于非胃腸給藥人用藥使用的角鯊烯和/或用于免疫佐劑的角鯊烯而言。低廉的藥用級角鯊烯來源對于某些發展中國家來說特別有用，這些國家或者鯊魚資源有限，或者無法承擔目前所用(例如諾華所用)昂貴的藥用級原材料。

發明內容

本發明涉及由超量生產角鯊烯的酵母生產角鯊烯的方法。酵母是GRAS(通常認為安全的)微生物，因此適合用作藥用角鯊烯的來源。并且，由此制備角鯊烯可避免病原體、朊病毒和環境毒素的污染，例如，已知酵母是不含汞的。由于疫苗領域已經在使用酵母(例如用于乙肝表面抗原的重組表達)，所以不會產生特別的規則問題，換言之，來自酵母的角鯊烯特別適合用于制備免疫佐劑。最后，酵母培養技術廣為人知，非常容易進行技術轉用。

基于此，本發明提供了一種制備純角鯊烯的方法，包括以下步驟：(a)培養在培養期間高產率生產角鯊烯的酵母；和(b)從步驟(a)培養的酵母中純化角鯊烯。純化得到的角鯊烯可用于制備藥物、食品、食品添加劑和化妝品等。

本發明還提供一種制備含角鯊烯產品的方法，包括以下步驟：(a)獲取業已從培養期間高產率生產角鯊烯的酵母中純化的角鯊烯；和(b)將步驟(a)的角鯊烯與非角鯊烯組分組合形成含角鯊烯的產品。

本發明還提供培養期間高產率生產角鯊烯的酵母用于制備純化角鯊烯的用途。本發明還提供一種制備純化角鯊烯的方法，包括以下步驟：

(a)在能使酵母高產率地生產角鯊烯的條件下培養酵母；

(b)從培養的酵母中純化角鯊烯，得到純度≥97wt％的角鯊烯。

本發明還提供一種制備水包油乳液的方法，包括以下步驟：(a)從培養期間高產率生產角鯊烯的酵母中純化角鯊烯；和(b)將步驟(a)中純化的角鯊烯與水性組分組合形成水包油乳液。

本發明還提供一種制備水包油乳液的方法，包括以下步驟：(a)獲取業已從培養期間高產率生產角鯊烯的酵母中純化的角鯊烯；和(b)將步驟(a)的角鯊烯與水性組分組合形成水包油乳液。

本發明還提供一種制備免疫原性組合物(例如疫苗)的方法，包括：如上所述制備水包油乳液，將所得乳液與免疫原混合。

本發明還提供一種制備試劑盒的方法，所述試劑盒是用于按照本發明方法制備免疫原性組合物的，所述制備試劑盒的方法包括：如上所述制備水包油乳液，將所得乳液裝入第一容器，將該第一容器與含有免疫原的第二容器組合成試劑盒。所述免疫原可以是無水形式的，或者是含水形式的。

本發明還提供一種增強動物(例如哺乳動物)免疫應答的方法，包括給予動物按照本發明方法制備的免疫原性組合物。

本發明還提供用于制造增強哺乳動物免疫應答的藥物的角鯊烯，所述角鯊烯是(i)從培養期間高產率生產角鯊烯的酵母中純化的，并且，(ii)與水性組分組合形成水包油乳液，該水包油乳液將包含在所述藥物中。