[發明專利]在載體上固定化核酸的方法

有效

• 申請號: 200980138951.2
• 申請日: 2009-09-22
• 公開（公告）號: CN102171368A
• 公開（公告）日: 2011-08-31
• 發明（設計）人: A.皮里克;H.R.斯塔珀特
• 申請（專利權）人: 皇家飛利浦電子股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李波;劉鵬

1.?一種在載體上固定化核酸的方法，其包括以下步驟：

（a）提供帶有僅一種堿基類型的核苷酸段的核酸；及

（b）通過光交聯在固體載體上固定化所述核酸，其中所述光交聯在約300-500nm的波長下進行，優選在365nm的波長進行。

2.?權利要求1的方法，其中所述核酸是DNA、RNA、PNA、CNA、HNA、LNA或ANA，其寡核苷酸或其任何的組合。

3.?權利要求1或2的方法，其中所述核酸是雙鏈的或單鏈的。

4.?權利要求1的方法，其中所述僅一種堿基類型的核苷酸段是鳥嘌呤或尿嘧啶段。

5.?權利要求4的方法，其中所述僅一種堿基類型的核苷酸段具有約7到約100個核苷酸的長度，優選約16個核苷酸。

6.?權利要求1的方法，其中所述僅一種堿基類型的核苷酸段定位在所述核酸的3'或5'端。

7.?權利要求1或3-6中任意一項的方法，其中所述核酸由下式表示：

5’-Y_n-X_m-B_r-X_p-Z_q-3’

Y和Z是僅一種堿基類型的核苷酸段，其中Y和Z可以是相同或不同的堿基類型；?X是間隔，優選由脫堿基核苷酸組成；B是多于一種堿基類型的序列，以及n、m、r、p?和q是核酸中核苷酸的數量，其中以下情況可以應用：n、m、p、q、r?>1；?n、m、r?>?1?且?p、q?=?0；?p、q、r?>1?且?n、m?=?0；?n、q、r?>?1?且?m、p?=?0；?n、r?>?1?且?m、p、q?=?0；?q、r?>?1?且?n、m、p?=?0。

8.?權利要求1的方法，其中所述交聯使用能量為從約0.5?Joule/cm²到約10?Joule/cm²范圍的量進行。

9.?權利要求1的方法，其中所述固體載體包含胺官能化的基團。

10.?權利要求1或9中的方法，其中所述固體載體包含伯胺或仲胺和/或補骨脂素。

11.?權利要求9或10的方法，其中所述固體載體是多孔基片，優選由尼龍組成，或無孔基片，優選由玻璃、聚-?L?-賴氨酸涂層材料、硝酸纖維素、聚苯乙烯、環烯烴共聚物（COC）、環烯烴聚合物COP、聚丙烯、聚乙烯或聚碳酸酯組成。

12.?一種根據權利要求1到11的任意一項的方法固定化的核酸的分析方法，包括以下步驟：

a)?所述固定化核酸與至少一種包含與所述固定化核酸的區域互補的片段的多聚核苷酸雜交探針，和至少一種包含攜帶與所述固定化核酸的區域相比單錯配的片段的核酸雜交探針；和/或至少一種包含攜帶與所述固定化核酸的區域相比雙錯配的片段的核酸雜交探針，和/或至少一種包含攜帶更高數量的錯配的片段的核酸雜交探針雜交；及

b)?確定由固定化核酸和所述雜交探針形成的雜合體的解鏈點，其中解鏈點與存在于核酸雜交探針中的錯配的類型和/或數量以及在僅一種堿基類型的核苷酸段中僅一種堿基類型的核苷酸的數量相關。

13.?通過根據權利要求1到11中任意一項的方法可獲得的固定化核酸。

14.?根據權利要求1到11中任意一項的方法固定化的核酸用于生產核酸陣列的應用。

15.?一種診斷試劑盒，其包含核酸陣列和對照探針，所述核酸陣列根據權利要求1到11中任意一項的方法被固定化，所述對照探針含有確定量的與至少一條所述的固定化核酸互補的已知的標記核酸。