[發明專利]乳腺癌轉移的判斷方法及血清的評價方法無效

申請號：	200980136797.5	申請日：	2009-09-17
公開（公告）號：	CN102159728A	公開（公告）日：	2011-08-17
發明（設計）人：	山本憲明;梶田昌裕;酒井綾子	申請（專利權）人：	希森美康株式會社
主分類號：	C12Q1/68	分類號：	C12Q1/68;C12N15/09
代理公司：	北京市安倫律師事務所 11339	代理人：	張小英
地址：	日本國***	國省代碼：	日本;JP
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摘要：
搜索關鍵詞：	乳腺癌轉移判斷方法血清評價
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【說明書】：

技術領域：

本發明涉及一種用于判斷接受過乳腺癌摘除手術的患者有無乳腺癌轉移的乳腺癌轉移判斷方法，以及有助于獲得判斷乳腺癌轉移的指標的血清的評價方法。

本申請要求于2008年9月19日申請的日本國專利申請第2008-241302號的優先權，在此引用其全部內容。

背景技術：

在接受了乳腺癌摘除手術的患者中，確認有無乳腺癌轉移對于決定術后治療方針上非常重要。特別是當發現有癌轉移到遠離原發灶的臟器和淋巴結的遠處轉移時，在對患者施以適當治療的基礎上，確認有無乳腺癌轉移極為重要。

診斷因術后乳腺癌轉移而導致的癌癥復發的方法已知有超音波(echo)、MRI(核磁共振)、乳房X光攝影檢查等圖像檢查。然而，這些圖像檢查有一些缺陷，比如需要熟練的技術，做圖像檢查時所使用的裝置會給患者帶來不快，且成本高等。

在人等高等真核生物的染色體DNA中，CG二核苷酸序列構成的CpG部位的胞嘧啶有時會被甲基化。此CpG部位的胞嘧啶甲基化發揮著抑制基因表達的功能。比如，基因的啟動子區存在含有大量CpG部位的區域，此基因的啟動子區胞嘧啶有無甲基化控制著該基因的DNA的轉錄的開關。

DNA甲基化對基因表達的控制在早期胚胎發育、組織特異性的基因表達、基因印記、X染色體失活、染色體穩定化、DNA復制類型等各種現象中發揮著重要的作用。已有報告稱，很有可能DNA的甲基化與癌癥等疾病有很大關系。

分析上述DNA甲基化的方法已知有甲基化特異性PCR法。此方法用亞硫酸氫鹽等將非甲基化胞嘧啶轉化為其他堿基基的試劑(非甲基化胞嘧啶轉化劑)，將待分析DNA的非甲基化的胞嘧啶(非甲基化胞嘧啶)轉化為其他堿基(非甲基化胞嘧啶轉化處理)。然后用引物組對擴增胞嘧啶未轉成其他堿基的序列，進行PCR反應，通過檢查有無擴增產物即可檢測出DNA有無甲基化。

在此，已知GSTP1、RASSF1A和RARb都是CpG島在乳腺癌原發灶高度甲基化的基因。非專利文獻1上記述了一種乳腺癌鑒別方法，即通過調查采自患者的血清中所含APC、GSTP1、RASSF1A以及RARb的CpG島有無甲基化來鑒別乳腺癌。然而，非專利文獻1關于判斷術后患者中有無乳腺癌轉移的方法毫無記述。

先行技術文獻

非專利文獻

非專利文獻1：穆罕默德·O·霍克(Mohammad?O.Hoque)等人，《乳腺癌檢測用血漿DNA中的四基因異常甲基化檢測(Detection?of?Aberrant?Methylation?of?Four?Genes?in?Plasma?DNA?for?the?Detection?of?Breast?Cancer)》，臨床腫瘤學雜志(Journal?of?Clinical?Oncology)，第24卷，第26號，2006年9月10日，p.4262-4269。

發明內容：

本發明的目的是提供一種可以在不給患者帶來痛苦的情況下、低成本、便捷地判斷接受了乳腺癌摘除術后的患者有無乳腺癌轉移的乳腺癌轉移判斷方法。本發明的另一個目的是一種血清評價方法，該方法可以在不給患者帶來不快的情況下、低成本、便捷地獲取幫助判斷接受了乳腺癌摘除術后的患者有無乳腺癌轉移的指標。

即，本發明涉及：

(1)一種乳腺癌轉移判斷方法，包括以下步驟：

獲取步驟，獲取乳腺癌摘除術后患者的血清；

檢測步驟，檢測在獲取步驟中獲得的血清中所含GSTP1、RASSF1A和RARb各自的CpG島中的甲基化；

判斷步驟，當檢測步驟從選自由GSTP1、RASSF1A和RARb構成的組中至少之一的CpG島檢測出甲基化時，判斷為乳腺癌轉移；

(2)根據上述(1)所述方法，其特征在于，轉移是遠處轉移；

(3)根據上述(1)所述方法，其特征在于，在檢測步驟用甲基化特異性PCR法檢測GSTP1、RASSF1A和RARb各自的CpG島的甲基化；

(4)根據上述(1)所述方法，其特征在于，甲基化特異性PCR法用以下三個引物組實施：

含有序列號1和序列號2所示引物的第一引物組，

含有序列號3和序列號4所示引物的第二引物組，