[發明專利]具有提高的活性的β-葡糖苷酶變體及其用途

有效

• 申請號: 200980136701.5
• 申請日: 2009-09-10
• 公開（公告）號: CN102149819A
• 公開（公告）日: 2011-08-10
• 發明（設計）人: 尼古拉斯·洛普·費雷拉;安東尼·馬爾若;于格·馬蒂;洛朗·富拉熱
• 申請（專利權）人: IFP新能源公司;普羅托斯公司
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42;C12N9/24;C12N15/81
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 陳文平

1.一種與野生型BGL1蛋白(SEQ?ID?No.2)的β-葡糖苷酶活性相比具有提高的β-葡糖苷酶活性的分離的或純化的多肽，其特征在于它含有一種氨基酸序列，其中至少一個氨基酸與氨基酸序列SEQ?ID?No.2相比是經修飾的，所述經修飾的氨基酸選自氨基酸序列SEQ?ID?No.2的第225位、第238位、第240位和第241位。

2.根據權利要求1所述的多肽，其特征在于與所述氨基酸序列SEQ?ID?No.2相比，所述氨基酸序列的至少一個氨基酸是經修飾的，所述修飾選自Q225H、V238I、T240G和T241S。

3.根據權利要求1或2所述的多肽，其特征在于所述多肽還包含至少一個另外的經修飾的氨基酸，所述修飾的氨基酸選自氨基酸序列SEQ?ID?No.2的位置97、99、100、118、119、121、123、126、127、128、130、132、134、135、140、147、151、153、163、168、173、174、177、179、182、187、193、206、207、212、217和621。

4.根據權利要求1-3中任一項所述的多肽，其特征在于所述多肽還包含至少一個另外的經修飾的氨基酸，所述修飾選自：V97I、Y99F、S100G、V118T、N119E、I121M、E123Q、Q126E、F127Y、I128L、E130A、V132A、A134G、S135C、S135V、I140L、P147A、T151I、Q153H、V163T、T168A、G173A、G173S、Q174E、N177E、I179L、V182A、V182N、T187C、L193V、N206D、P207V、L212M、T217L、L621F和L621T。

5.根據權利要求1-4中任一項所述的分離的或純化的多肽，其特征在于所述多肽選自：

選自SEQ?ID?No.4、SEQ?ID?No.6、SEQ?ID?No.8、SEQ?ID?No.10、SEQ?ID?No.12、SEQ?ID?No.14的氨基酸序列；或

-氨基酸序列SEQ?ID?No.X，其具有：

i)相對于SEQ?ID?No.4、6、8、10、12或14的長度，至少70％，優選75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％的相同殘基百分比；

ii)相對于SEQ?ID?No.X的長度，至少70％，優選75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％的相同殘基百分比。

6.一種純化的或分離的核酸，其特征在于其編碼權利要求1-5中任一項所述的至少一種多肽。

7.一種載體，其特征在于其包含權利要求6所述的核酸。

8.一種分離的宿主細胞，其特征在于它包含權利要求1-5中任一項所述的至少一種多肽，或包含權利要求6所述的至少一種核酸，或包含權利要求7所述的至少一種載體。

9.根據權利要求8所述的分離的宿主細胞、其特征在于其選自：木霉菌屬、曲霉菌屬、脈孢菌屬、腐質霉菌屬、青霉菌屬、鐮孢菌屬、熱單孢菌屬、芽孢桿菌屬、假單胞菌屬、埃希氏菌屬、梭菌屬、纖維單胞菌屬、鏈霉菌屬、亞羅酵母屬、畢赤酵母和酵母屬。

10.根據權利要求8或9所述的分離宿主細胞，其特征在于其選自：里氏木霉菌，綠色木霉菌，康氏木霉菌，黑曲霉菌，構巢曲霉菌，文氏曲霉菌，米曲霉菌，海棗曲霉菌，粗糙脈孢霉菌，灰色腐殖霉菌，嗜松青霉菌，草酸青霉菌，大腸桿菌，丙酮丁醇桿菌，解糖梭菌，拜氏梭菌，丁酸梭菌及其混合物。

11.根據權利要求1-5中任一項所述的多肽用于β-寡糖的水解的用途。

12.根據權利要求1-5中任一項所述的多肽用于將纖維二糖水解成葡萄糖的用途。

13.根據權利要求1-5中任一項所述的多肽用于制備生物燃料的用途。

14.一種對木質纖維素生物質起作用的酶組合物，所述酶組合物是由絲狀真菌產生的，而且包含權利要求1-5中任一項所述的至少一種多肽。