[發(fā)明專利]生產(chǎn)L-氨基酸的微生物和L-氨基酸的生產(chǎn)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200980134943.0
• 申請日: 2009-09-04
• 公開（公告）號: CN102177246A
• 公開（公告）日: 2011-09-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 瀧川里繪;原吉彥;野中源;宅見和浩
• 申請（專利權(quán)）人: 味之素株式會社
• 主分類號: C12P13/04
• 分類號: C12P13/04;C12N9/04;C12N15/09
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務(wù)所 11105
• 代理人: 羅天樂

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及使用微生物的L-氨基酸生產(chǎn)方法，特別是L-谷氨酸、L-賴氨酸、L-蘇氨酸、L-色氨酸等L-氨基酸的生產(chǎn)方法。L-谷氨酸作為調(diào)味品、L-賴氨酸、L-蘇氨酸和L-色氨酸作為動物飼料用添加劑、健康食品成分或氨基酸輸液等，在產(chǎn)業(yè)上是有用的L-氨基酸。

背景技術(shù)

L-氨基酸是通過使用各種微生物的發(fā)酵方法來進行工業(yè)生產(chǎn)的。例如，L-谷氨酸主要是通過使用屬于短桿菌屬(Brevibacterium)、棒桿菌屬(Corynebacterium)、分枝桿菌屬(Mycobacterium)的稱為棒狀桿菌型細菌中的L-谷氨酸生產(chǎn)菌或其突變株的發(fā)酵法來進行生產(chǎn)(參照例如非專利文獻1)。作為通過使用其它微生物的發(fā)酵法進行的L-谷氨酸生產(chǎn)方法，已知有使用芽孢桿菌屬(Bacillus)、鏈霉屬(Streptomyces)、青霉屬(Penicillium)等的微生物(參照例如專利文獻1)，假單胞菌屬(Pseudomonas)、節(jié)桿菌屬(Arthrobacter)、沙雷氏菌屬(Serratia)、假絲酵母屬(Candida)等的微生物(參照例如專利文獻2)，芽孢桿菌屬、假單胞菌屬、沙雷氏菌屬、產(chǎn)氣氣桿菌(Aerobacter?aerogenes)(現(xiàn)稱產(chǎn)氣腸桿菌(Enterobacter?aerogenes))等的微生物(參照例如專利文獻3)，大腸桿菌突變株(參照例如專利文獻1)等的方法。此外，還公開了使用屬于克雷伯氏菌屬(Klebsiella)、歐文氏菌屬(Erwinia)或泛菌屬(Pantoea)、腸桿菌屬的微生物的L-谷氨酸生產(chǎn)方法(參照例如專利文獻2～4)。

為了通過諸如上述的使用微生物的發(fā)酵法生產(chǎn)L-氨基酸等目的物質(zhì)，可以采用使用野生型微生物(野生株)的方法、使用從野生株衍生的營養(yǎng)缺陷型株的方法、使用從野生株作為各種藥物抗性突變株衍生的代謝調(diào)節(jié)突變株的方法、使用具有營養(yǎng)缺陷型株和代謝調(diào)節(jié)突變株這兩者的性質(zhì)的菌株的方法等。

而且，近年來在目的物質(zhì)的發(fā)酵生產(chǎn)中采用了重組DNA技術(shù)。例如，通過增強L-氨基酸生物合成體系酶編碼基因的表達(專利文獻5、專利文獻6)、或增強L-氨基酸生物合成體系的碳源流入(專利文獻7)來提高微生物的L-氨基酸生產(chǎn)力。

葡萄糖脫氫酶大體上可分為NAD(P)依賴型和PQQ(吡咯并喹啉醌)依賴型。進一步，已知PQQ依賴型(EC1.1.5.2)又包括可溶型和膜結(jié)合型，且后者在腸桿菌科細菌中存在于周質(zhì)空間(外膜、內(nèi)膜間的空隙)，且在腸桿菌科細菌中廣泛存在。以下，將這種存在于周質(zhì)空間的以PQQ為輔酶的葡萄糖脫氫酶也記作“GCD”。

已知大腸桿菌等一部分細菌不具有GCD輔酶PQQ的合成能力，只有通過添加PQQ才會表現(xiàn)GCD活性(非專利文獻2)。另一方面，泛菌屬細菌等細菌具有PQQ合成能力，其具有GCD全酶。

作為涉及GCD的技術(shù)，已知有利用GCD編碼基因被缺損的木葡糖桿菌(Gluconobacter?xylnus)從葡萄糖生產(chǎn)纖維素的方法(J.Biosci.Bioeng.99(4)，415-422，2005)。此外，還已知利用葡萄糖脫氫酶活性降低的埃希氏菌屬細菌、或固有缺失葡萄糖脫氫酶活性的埃希氏菌屬細菌生產(chǎn)[5S，6S]-5，6-二羥基-1，3-環(huán)己二烯-1-羧酸的方法(專利文獻8)。

然而，尚不清楚細菌GCD活性的降低對L-氨基酸生產(chǎn)能力的影響。

現(xiàn)有技術(shù)文獻

專利文獻

專利文獻1：特開平5-244970號公報

專利文獻2：美國專利第3,563,857號說明書

專利文獻3：特公昭32-9393號公報

專利文獻4：特開2000-189175號公報

專利文獻5：美國專利第5168056號說明書

專利文獻6：美國專利第5776736號說明書

專利文獻7：美國專利第5906925號說明書

專利文獻8：國際公開第WO2006/133898號小冊子

非專利文獻

非專利文獻1：明石邦彥等著，アミノ酸発酵，學(xué)會出版中心，195～215頁，1986年

非專利文獻2：FEMS?Microbiol.Lett.，24，329-333，1984

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明所要解決的問題

本發(fā)明的課題是：提供提供能夠高效生產(chǎn)L-氨基酸的屬于腸桿菌科的微生物，以及使用該微生物高效生產(chǎn)L-氨基酸的方法。

解決問題的方法