[發(fā)明專利]變異型酶的設(shè)計法、制備方法和變異型酶有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 200980134865.4 | 申請日： | 2009-08-12 |
| 公開（公告）號： | CN102597232A | 公開（公告）日： | 2012-07-18 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 橋爪亮太;三上文三;松原寬敬;松永亞希子;山口莊太郎 | 申請（專利權(quán)）人： | 天野酶株式會社 |
| 主分類號： | C12N15/09 | 分類號： | C12N15/09;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N5/10;C12N9/00;C12P21/02 |
| 代理公司： | 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227 | 代理人： | 苗堃;金世煜 |
| 地址： | 日本*** | 國省代碼： | 日本;JP |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 異型 設(shè)計 制備 方法 | ||
1.變異型酶的設(shè)計法，包含以下步驟：
(1)蛋白質(zhì)脫酰胺酶(變異對象酶)的氨基酸序列中，確定從以下氨基酸組成的組中選擇的一個或兩個以上的氨基酸的步驟：相當于序列號2所示的氨基酸序列的35位氨基酸的氨基酸、相當于38位氨基酸的氨基酸、相當于39位氨基酸的氨基酸、相當于40位氨基酸的氨基酸、相當于41位氨基酸的氨基酸、相當于42位氨基酸的氨基酸、相當于43位氨基酸的氨基酸、相當于45位氨基酸的氨基酸、相當于46位氨基酸的氨基酸、相當于49位氨基酸的氨基酸、相當于79位氨基酸的氨基酸、相當于80位氨基酸的氨基酸、相當于81位氨基酸的氨基酸、相當于82位氨基酸的氨基酸、相當于83位氨基酸的氨基酸、相當于84位氨基酸的氨基酸、相當于103位氨基酸的氨基酸、相當于104位氨基酸的氨基酸、相當于105位氨基酸的氨基酸、相當于106位氨基酸的氨基酸、相當于117位氨基酸的氨基酸、相當于142位氨基酸的氨基酸、相當于143位氨基酸的氨基酸、相當于146位氨基酸的氨基酸、相當于166位氨基酸的氨基酸、和相當于185位氨基酸的氨基酸；
(2)構(gòu)建基于變異對象酶的氨基酸序列，將在步驟(1)確定的氨基酸取代為其它氨基酸或刪除而得到的氨基酸序列的步驟。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的變異型酶的設(shè)計法，在步驟(1)中，確定從以下氨基酸組成的組中選擇的一個或兩個以上的氨基酸：相當于序列號2所示的氨基酸序列的39位氨基酸的氨基酸、相當于40位氨基酸的氨基酸、相當于41位氨基酸的氨基酸、相當于43位氨基酸的氨基酸、相當于79位氨基酸的氨基酸、相當于80位氨基酸的氨基酸、相當于81位氨基酸的氨基酸、相當于82位氨基酸的氨基酸、相當于142位氨基酸的氨基酸、相當于143位氨基酸的氨基酸、相當于146位氨基酸的氨基酸、相當于166位氨基酸的氨基酸、和相當于185位氨基酸的氨基酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的變異型酶的設(shè)計法，在步驟(1)中，確定相當于序列號2所示的氨基酸序列的82位氨基酸的氨基酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的變異型酶的設(shè)計法，在步驟(1)中，確定從以下氨基酸組成的組中選擇的一個或兩個以上的氨基酸：相當于序列號2所示的氨基酸序列的35位氨基酸的氨基酸、相當于38位氨基酸的氨基酸、相當于40位氨基酸的氨基酸、相當于41位氨基酸的氨基酸、相當于42位氨基酸的氨基酸、相當于43位氨基酸的氨基酸、相當于45位氨基酸的氨基酸、相當于46位氨基酸的氨基酸、相當于49位氨基酸的氨基酸、相當于80位氨基酸的氨基酸、相當于81位氨基酸的氨基酸、相當于82位氨基酸的氨基酸、相當于83位氨基酸的氨基酸、相當于84位氨基酸的氨基酸、相當于103位氨基酸的氨基酸、相當于104位氨基酸的氨基酸、相當于105位氨基酸的氨基酸、相當于106位氨基酸的氨基酸、和相當于117位氨基酸的氨基酸。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的變異型酶的設(shè)計法，在步驟(1)中，確定相當于序列號2所示的氨基酸序列的84位氨基酸的氨基酸。
6.根據(jù)權(quán)利要求1～5中任一項所述的變異型酶的設(shè)計法，在步驟(1)中氨基酸的確定，是通過比較所述變異對象酶的氨基酸序列與序列號2表示的氨基酸序列、以及/或者比較所述變異對象酶的立體構(gòu)造與由序列號2表示的氨基酸序列構(gòu)成的酶的立體構(gòu)造來進行的。
7.根據(jù)權(quán)利要求1～6中任一項所述的變異型酶的設(shè)計法，將步驟(1)中確定的氨基酸取代為電荷狀態(tài)不同的氨基酸。
8.根據(jù)權(quán)利要求1～7中任一項所述的變異型酶的設(shè)計法，所述變異對象酶是野生型酶。
9.根據(jù)權(quán)利要求1～8中任一項所述的變異型酶的設(shè)計法，所述變異對象酶是微生物來源的蛋白質(zhì)脫酰胺酶。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的變異型酶的設(shè)計法，所述變異對象酶是金黃桿菌屬來源的蛋白質(zhì)谷氨酰胺酶。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的變異型酶的設(shè)計法，所述變異對象酶是解朊金黃桿菌來源的蛋白質(zhì)谷氨酰胺酶。
12.根據(jù)權(quán)利要求1～11中任一項所述的變異型酶的設(shè)計法，所述變異對象酶的氨基酸序列與序列號2所示的氨基酸序列具有70％以上的同源性。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于天野酶株式會社，未經(jīng)天野酶株式會社許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/200980134865.4/1.html，轉(zhuǎn)載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
