[發(fā)明專利]體液中細(xì)胞成分的解離

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200980129078.0
• 申請(qǐng)日: 2009-07-23
• 公開（公告）號(hào): CN102105796A
• 公開（公告）日: 2011-06-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: D·塞德爾
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 瑟伯有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/80
• 分類號(hào): G01N33/80;A61L2/18
• 代理公司: 中國(guó)國(guó)際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專利商標(biāo)事務(wù)所 11038
• 代理人: 羅菊華

【技術(shù)領(lǐng)域】

本發(fā)明指通過(guò)在提供細(xì)胞成分的基本上定量解離而基本上無(wú)流體成分的沉積，沉淀，變性，凝集及膠凝發(fā)生的條件下快速冷凍/解凍處理來(lái)處理包括細(xì)胞成分的生物流體的方法及裝置。方法對(duì)于制備用于分析物檢測(cè)的生物樣品特別有用。

【背景技術(shù)】

已在各種研究中研究血細(xì)胞的冷凍及溶血效應(yīng)。Scheiwe?等人(Cryobiology?19，1982，p.461-477)研究了以不同線性冷卻速度用或不用冷凍保護(hù)劑羥乙基淀粉(HES)降至-196℃的小的玻璃毛細(xì)管中分離的及濃縮的紅細(xì)胞的懸浮液的冷凍。從作為冷卻速度的函數(shù)的溶血的U-形曲線得出，對(duì)于例如0.6的血細(xì)胞比容(Hct)，及在缺乏HES的情況下，必需用大致100℃/分鐘的冷卻速度處理細(xì)胞懸浮液，以便實(shí)現(xiàn)100％溶血。具有更低的分別0.4和0.2的Hct的紅細(xì)胞懸浮液，在這些條件下產(chǎn)生80～90％溶血。在HES的存在下可實(shí)現(xiàn)50～60％的溶血率。大致5000℃/分鐘的冷卻速度顯示大致40％溶血。

Rapatz及Luyet以保存人紅細(xì)胞的方式研究了冷凍溫度，冷凍速度或保護(hù)試劑(例如冷凍保護(hù)劑)對(duì)全血樣品的效應(yīng)(Cryobiology?4，1968，pp.215-222)。相應(yīng)實(shí)驗(yàn)已在具有1.5+/-0.5mm外徑及0.3+/-0.5mm的壁厚度的玻璃毛細(xì)管中進(jìn)行。在另一出版物中，作者研究了血的快速冷凍后幾種動(dòng)物物種中的溶血(J.Cell.Physiol.77，1970，pp.373-376)。對(duì)紅細(xì)胞溶血的新近結(jié)果也在綜述″A?review?on?basic?researches?on?the?cryopreservation?of?red?blood?cells″中總結(jié)(Luyet?and?Rapatz，Cryobiology?6，1970，pp.425-482)。

但是，無(wú)出版物應(yīng)對(duì)全血樣品的冷凍給出線索，有關(guān)如何獲得來(lái)自包括細(xì)胞成分的生物樣品的經(jīng)處理的流體，從而將含于生物樣品的基本上全部細(xì)胞成分定量解離，然而基本上無(wú)流體成分的沉積，沉淀，變性，凝集及膠凝發(fā)生。也無(wú)在分析中使用經(jīng)處理的全血的導(dǎo)向。

在來(lái)自生物流體的樣品中的分析物的測(cè)定常要求復(fù)雜的及繁瑣的預(yù)處理過(guò)程，以便去除來(lái)自流體樣品的細(xì)胞成分。別的細(xì)胞成分或沉積物將阻塞樣品注射裝置，毛細(xì)管，分離柱等。例如，全血含成分，即紅細(xì)胞，白細(xì)胞及血小板。為測(cè)定血樣品中的分析物，這些細(xì)胞成分常必需通過(guò)預(yù)處理過(guò)程(例如離心，過(guò)濾或沉積)除去。

關(guān)于代表主要血級(jí)分的紅細(xì)胞，樣品預(yù)處理涉及使用(生物)化學(xué)試劑，滲透壓休克(即通過(guò)低-或高滲溶液)和/或機(jī)械處理溶血。但是，溶血產(chǎn)生由血漿及所謂的源于紅細(xì)胞的血影組成的裂解產(chǎn)物。這些血影耗盡了血紅蛋白及仍具有天然的紅細(xì)胞的尺寸。這意味著，也必需在分析之前通過(guò)離心，過(guò)濾或沉積除去血影。

但是，這些過(guò)程常難以整合進(jìn)自動(dòng)化的測(cè)試形式。尤其是在靶分析物存在于細(xì)胞成分的胞質(zhì)溶膠或膜的情況中，例如紅細(xì)胞中的免疫-抑制藥物。此情況中，將細(xì)胞成分在添加裂解試劑之前通過(guò)離心和/或過(guò)濾分離富含，或通過(guò)將變性劑(例如ZnSO₄及乙腈的混合物)添加到原樣品來(lái)將它們變性，然后離心。

剛剛提議用于處理用于分析物測(cè)定的生物流體的新方法。此方法基于熱處理，及適宜于自動(dòng)化的過(guò)程(WO?2008/003451)。但是，此方法強(qiáng)烈依賴于小的溫度范圍的溫度，從而需要復(fù)雜的溫度控制。處理也被t_max，發(fā)生凝固的溫度限制。此外，添加有機(jī)修飾物(例如甲醇)影響加熱處理從而處理參數(shù)。而且，非每含于生物流體的分析物在推薦的熱處理期間穩(wěn)定。因此，如果要測(cè)定熱不穩(wěn)定的分析物，此方法不太優(yōu)選。

【發(fā)明概述】

由此，本發(fā)明的課題是提供在以下條件下包括細(xì)胞成分的生物流體的新處理方法：

(i)提供所述細(xì)胞成分的基本上定量解離，

(ii)不導(dǎo)致流體成分的實(shí)質(zhì)性沉積，沉淀，變性，凝集及膠凝，

(iii)不局限于小的溫度范圍，及

(iv)允許添加其他不影響處理的流體，例如甲醇等。

以上問(wèn)題的解決通過(guò)提供權(quán)利要求中表征的實(shí)施方式來(lái)實(shí)現(xiàn)。

根據(jù)本發(fā)明的第一方面，提供在以下條件下產(chǎn)生經(jīng)處理的生物流體的方法：

(i)提供所述細(xì)胞成分的基本上定量解離，及

(ii)不導(dǎo)致流體成分的實(shí)質(zhì)性沉積，沉淀，變性，凝集及膠凝，

包括下列步驟：

(a)提供包括細(xì)胞成分的生物流體，

(b)冷凍所述生物流體，及

(c)解凍步驟(b)的冷凍的流體。