[發(fā)明專利]用于分離和/或純化核酸的裂解、結合和/或洗滌試劑有效

申請?zhí)枺?/td>	200980120902.6	申請日：	2009-05-25
公開（公告）號：	CN102046793A	公開（公告）日：	2011-05-04
發(fā)明（設計）人：	R·法比斯;A·霍曼-維施沁斯基;T·沃斯;T·漢斯勒	申請（專利權）人：	恰根有限公司
主分類號：	C12N15/10	分類號：	C12N15/10
代理公司：	上海專利商標事務所有限公司 31100	代理人：	陶家蓉;張靜
地址：	德國***	國省代碼：	德國;DE
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摘要：
搜索關鍵詞：	用于分離純化核酸裂解結合洗滌試劑
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【說明書】：

技術領域

本發(fā)明涉及用于分離和/或純化核酸的裂解、結合和/或洗滌試劑及其方法。所述裂解、結合和/或洗滌試劑及方法尤其適用于分子診斷學目的。

發(fā)明背景

現(xiàn)有技術已經(jīng)揭示了從細胞、細胞培養(yǎng)物或病毒培養(yǎng)物分離和/或純化核酸如脫氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)的多種方法。

在該方面，手動進行的用于分離核酸的許多“經(jīng)典”方法是一步方法，包括在加入水性緩沖劑和有機萃取劑之后進行萃取。核酸保留在水相中，可在去除包含不良伴隨物質(zhì)的有機相之后分離得到。

這些方法首先使用正常無害的有機萃取劑如氯仿或苯酚，然后水溶性污染物保留在包含核酸的水相中并且需要進一步的純化步驟去除。

因此，本領域的替代方法獲得的重視，該方法基于使核酸選擇性吸附到固體、主要是礦物支持體如二氧化硅上。結合原則是基于在“離液鹽”和/或醇的影響下，核酸與二氧化硅表面的可逆結合。在多步方法中，將各種溶液或混合物，通常是裂解、結合、洗滌和/或洗脫溶液或混合物加入含核酸的樣品中，并且在最后的方法步驟中，將純化的核酸從在結合步驟中剛剛加入的支持體上洗脫下來。

兩種方法的基本原則基于在第一步中裂解的細胞，尤其是植物、動物、人、細菌和病毒細胞。為此，首先將細胞與破壞細胞的裂解緩沖液一起孵育。

現(xiàn)有技術揭示了用于裂解生物樣品細胞材料的緩沖劑和方法。已知的裂解緩沖劑常常包含表面活性劑聚氧乙烯脫水山梨醇單月桂酸酯(吐溫20)。使用該表面活性劑是為了將細胞裂解期間的污染轉(zhuǎn)化為可溶或者穩(wěn)定化狀態(tài)，將它們從核酸中去除。不幸的是，包含聚氧乙烯脫水山梨醇單月桂酸酯(吐溫20)的裂解緩沖劑儲存不穩(wěn)定。例如，pH降低。一個具體的缺點在于，如果使用這些裂解緩沖劑，則儲存后分離的核酸的產(chǎn)量降低。另一個缺點在于，包含核酸的洗脫液不透明，表明存在可能干擾分離核酸的進一步應用的污染。

因此，本發(fā)明的目的是提供克服至少一種上述現(xiàn)有技術的缺點的方法，該方法具有盡可能優(yōu)異或更好的裂解、結合和/或洗滌性質(zhì)。

如權利要求1所述的裂解、結合和/或洗滌試劑實現(xiàn)的本發(fā)明的目的。因此，提供了一種裂解、結合和/或洗滌試劑，其包含：

-至少一種離液化合物，

-至少一種緩沖化合物，優(yōu)選選自：三(羥甲基)氨基甲烷(TRIS)、N-(三(羥甲基)甲基)甘氨酸(TRICINE)、N，N-雙(2-羥乙基)甘氨酸(BICINE)、N-(2-羥乙基)哌嗪-N’-(2-乙磺酸)(HEPES)、哌嗪-1，4-雙(2-乙磺酸)(PIPES)、N-環(huán)己基-2-氨基乙磺酸(CHES)、2-(N-嗎啉代)乙磺酸(MES)、3-(N-嗎啉代)丙磺酸(MOPS)和/或磷酸鹽緩沖劑，和

-至少一種基于聚氧乙烯的非離子型表面活性劑，選自聚氧乙烯脂肪醇醚、聚氧乙烯烷基苯基醚和/或聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物，以試劑的總體積計，其用量從≥8％重量/體積到≤50％重量/體積。

出于本發(fā)明的目的，術語“裂解、結合和/或洗滌試劑”表示裂解試劑、結合試劑或洗滌試劑的試劑，或者可用作裂解試劑也可用作結合試劑也可用作洗滌試劑的試劑。更具體說，出于本發(fā)明的目的，術語“裂解、結合和/或洗滌試劑”也可表示本發(fā)明的裂解試劑、結合試劑和/或洗滌試劑的混合物。

出于本發(fā)明的目的，術語“試劑”表示裂解、結合和/或洗滌試劑。

出于本發(fā)明的目的，術語“離液化合物”表示以變性方式作用于蛋白質(zhì)的化合物，具體是破壞基于氫鍵形成的液態(tài)水的常規(guī)結構。

出于本發(fā)明的目的，術語“緩沖化合物”表示可以為水溶液提供緩沖或pH穩(wěn)定作用的化合物。

出于本發(fā)明的目的，術語“磷酸鹽緩沖劑”表示磷酸鹽，例如磷酸二氫鹽如磷酸二氫鉀(KH₂PO₄)或磷酸二氫鈉(NaH₂PO₄)，和磷酸氫鹽如磷酸氫二鈉(Na₂HPO₄·2H₂O)或磷酸氫二鉀。類似地，可使用磷酸鹽的混合物。另一種常用的磷酸鹽緩沖劑是包含氯化鈉、Na₂HPO₄、氯化鉀和KH₂PO₄的PBS(磷酸鹽緩沖鹽水)。