[發明專利]細胞法產生葡糖二酸

有效

• 申請號: 200980120747.8
• 申請日: 2009-04-03
• 公開（公告）號: CN102066552A
• 公開（公告）日: 2011-05-18
• 發明（設計）人: 文泰石;尹相活;克麗斯塔拉·拉內特·瓊斯·普拉瑟
• 申請（專利權）人: 麻省理工學院
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N1/11;C12N15/52;C12N15/63;C12P7/02;C07K16/00
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 顧晉偉;韓宏星

1.一種細胞，其重組表達編碼糖醛酸脫氫酶的基因并且重組表達編碼肌醇加氧酶的基因。

2.權利要求1的細胞，其中所述編碼糖醛酸脫氫酶的基因是細菌基因。

3.權利要求1或2的細胞，其中所述編碼糖醛酸脫氫酶的基因是丁香假單胞菌(Pseudomonas?syringae)基因或者惡臭假單胞菌(Pseudomonas?purida)基因。

4.權利要求1或2的細胞，其中所述編碼糖醛酸脫氫酶的基因是根瘤農桿菌(Agrobacterium?tumefaciens)基因。

5.權利要求1至4中任一項的細胞，其中所述編碼肌醇加氧酶的基因是哺乳動物基因。

6.權利要求5的細胞，其中所述編碼肌醇加氧酶的基因是小鼠基因。

7.權利要求1至6中任一項的細胞，其中所述細胞重組表達編碼肌醇-1-磷酸合酶的基因。

8.權利要求7的細胞，其中所述編碼肌醇-1-磷酸合酶的基因是酵母基因。

9.權利要求8的細胞，其中所述編碼肌醇-1-磷酸合酶的基因是釀酒酵母(Saccharomyces?cerevisiae)基因。

10.權利要求1至9中任一項的細胞，其中所述細胞是原核細胞。

11.權利要求10的細胞，其中所述細胞是細菌細胞。

12.權利要求11的細胞，其中所述細菌細胞是大腸桿菌(E.coli)細胞。

13.權利要求1至12中任一項的細胞，其中所述編碼肌醇加氧酶和/或肌醇-1-磷酸合酶的基因已經密碼子優化修飾，用于在細菌中表達。

14.權利要求1至9中任一項的細胞，其中所述細胞是真核細胞。

15.權利要求14的細胞，其中所述細胞是真菌細胞、酵母細胞、昆蟲細胞、植物細胞或者哺乳動物細胞。

16.權利要求1至15中任一項的細胞，其中所述編碼糖醛酸脫氫酶、肌醇加氧酶和/或肌醇-1-磷酸合酶的基因由質粒表達。

17.權利要求1至15中任一項的細胞，其中所述編碼糖醛酸脫氫酶、肌醇加氧酶和/或肌醇-1-磷酸合酶的基因被整合到所述細胞的基因組中。

18.權利要求1至17中任一項的細胞，其中通過所述細胞內糖醛酸脫氫酶、肌醇加氧酶和/或肌醇-1-磷酸合酶的蛋白質工程使葡糖二酸的產生增加。

19.權利要求1至18中任一項的細胞，其中通過使細胞內萄糖二酸代謝途徑的組分突變而使葡糖二酸的產生增加。

20.一種產生葡糖二酸的方法，包括培養權利要求1至19中任一項的細胞以產生葡糖二酸。

21.權利要求20的方法，還包括從所述細胞回收葡糖二酸。

22.一種經遺傳修飾的微生物，其包含編碼糖醛酸脫氫酶、肌醇加氧酶和肌醇-1-磷酸合酶的一個或多個重組核酸分子。

23.一種產生葡糖二酸的方法，所述方法包括對細胞進行遺傳修飾以使其重組表達糖醛酸脫氫酶、肌醇加氧酶和肌醇-1-磷酸合酶中的至少一種，培養所述細胞的群以及從已經遺傳修飾以產生萄糖二酸的該細胞群中收集葡糖二酸。

24.權利要求23的方法，其中所述細胞重組表達編碼糖醛酸脫氫酶的基因。

25.權利要求23或24的方法，其中所述細胞重組表達編碼肌醇加氧酶的基因。

26.權利要求23至25中任一項的方法，其中所述細胞重組表達編碼肌醇-1-磷酸合酶的基因。

27.權利要求23至26中任一項的方法，其中所述編碼糖醛酸脫氫酶的基因是細菌基因。

28.權利要求23至26中任一項的方法，其中所述編碼糖醛酸脫氫酶的基因是丁香假單胞菌基因或惡臭假單胞菌基因。

29.權利要求23至26中任一項的方法，其中所述編碼糖醛酸脫氫酶的基因是根瘤農桿菌基因。