[發明專利]使用抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的肝癌細胞的檢測法

無效

• 申請號: 200980116811.5
• 申請日: 2009-03-16
• 公開（公告）號: CN102027372A
• 公開（公告）日: 2011-04-20
• 發明（設計）人: 片岡寬章;高居宏武;加藤淳彥;鈴木雅實;杉本正道
• 申請（專利權）人: 國立大學法人宮崎大學;中外制藥株式會社
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/48;G01N33/543;C07K16/18
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 楊宏軍

1.一種用于檢測受試者體內肝癌細胞的存在的體外免疫測定方法，包括下述步驟：

(a)提供來自同一受試者的至少兩種能夠視為相同的一組組織標本作為石蠟包埋切片，所述組織標本由所述受試者制備之后，被包埋在石蠟中并安裝在透明性支持體上；

(b)對所述一組組織標本進行除石蠟處理；

(c)對進行了所述(b)處理的能夠視為相同的一組組織標本中的一方，進行利用熱誘導抗原活化法的抗原活化處理，對另一方進行利用蛋白酶抗原活化法的抗原活化處理；

(d)在適合于形成存在于經過所述(c)處理的組織標本中的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3和抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的復合體的條件下，使抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體與所述標本接觸；

(e)檢測復合體的存在，其中，當存在復合體時判定受試者體內存在肝癌細胞。

2.如權利要求1所述的方法，其中，所述熱誘導抗原活化法利用微波加熱。

3.如權利要求1所述的方法，其中，所述熱誘導抗原活化法利用高壓釜加熱。

4.如權利要求1至3中任一項所述的方法，其中，所述蛋白酶抗原活化法中使用的蛋白酶選自胃蛋白酶、胰蛋白酶及蛋白酶K。

5.如權利要求1至4中任一項所述的方法，其中，用于檢測復合體的檢測反應為酶反應。

6.如權利要求1至5中任一項所述的方法，其中，所述抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為與磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的C末端多肽鍵合的抗體。

7.如權利要求6所述的方法，其中，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的C末端多肽為包含序列號1表示的第359號氨基酸至第580號氨基酸的多肽，或者為包含第375號氨基酸至第580號氨基酸的多肽。

8.如權利要求6或7所述的方法，其中，所述抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為GC33抗體。

9.如權利要求1至5中任一項所述的方法，其中，所述抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為1G12抗體。

10.如權利要求1至9中任一項所述的方法，其中，步驟(e)中，將復合體的存在進行數值化并檢測。

11.如權利要求10所述的方法，其中，所述數值化按照下式算出：

IR_Cp＝PR+(SI-Cp)+SP

式中，

IR_Cp為磷脂酰肌醇蛋白聚糖3表達量的評分；

PR為對顯微鏡下檢測出所述復合體的細胞比例進行評分得到的數值；

SI-Cp為對在顯微鏡下所述復合體在視野中細胞的細胞質中被檢測出的染色強度進行評分得到的數值；

SP為對在顯微鏡下的視野中細胞的細胞膜中顯示出完全膜染色的細胞比例進行評分得到的數值。

12.如權利要求10所述的方法，其中，所述數值化按照下式算出：

IR_Cm＝PR+(SI-Cm)+SP

式中，

IR_Cm為磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的膜局部化的評分；

PR為對顯微鏡下檢測出所述復合體的細胞比例進行評分得到的數值；

SI-Cm為對在顯微鏡下所述復合體在視野中細胞的細胞膜中被檢測出的染色強度進行評分得到的數值；

SP為對在顯微鏡下的視野中細胞的細胞膜中顯示出完全膜染色的細胞比例進行評分得到的數值。

13.一種對肝癌細胞分類的方法，所述方法基于利用權利要求11及12所述的方法算出的評分，對存在于受試者體內的肝癌細胞進行分類。

14.一種確定是否給與抗癌劑的方法，所述方法基于利用權利要求11及12所述的方法算出的評分，確定是否給與受試者含有抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的抗癌劑。

15.一種確定抗癌劑給與量的方法，所述方法基于利用權利要求11及12所述的方法算出的評分，確定對受試者進行肝癌治療中含有抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的抗癌劑的給與量。