[發明專利]親和力成熟的CRIg變體

有效

• 申請號: 200980116490.9
• 申請日: 2009-05-06
• 公開（公告）號: CN102015763A
• 公開（公告）日: 2011-04-13
• 發明（設計）人: 薩科德夫·S·西多;李冰;曼諾·范盧克倫坎帕格尼;克里斯琴·威斯曼
• 申請（專利權）人: 健泰科生物技術公司
• 主分類號: C07K14/705
• 分類號: C07K14/705;G01N33/68;A61K38/17;A61P37/00
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 張紅春

發明領域

本發明關注親和力成熟的CRIg變體。具體而言，本發明關注具有提高的對C3b的結合親和力且保留勝過C3的對C3b的選擇性結合的CRIg變體。

發明背景

補體系統

補體系統是由正常情況下以無活性的酶原形式存在的一系列血清糖蛋白構成的復雜酶級聯。三種主要途徑，即經典、旁路和甘露糖結合凝集素途徑，能活化補體，它們在C3水平合并，其中兩種類似的C3轉化酶將C3切割成C3a和C3b。

巨噬細胞是已經發展出如下先天能力的專門細胞，即識別細胞表面表達的鑒定標簽的結構中的微小差異，所述的鑒定標簽即所謂的分子樣式(Taylor等，Eur?J?Immunol?33，2090-1097(2003)；Taylor等，Annu?Rev?Immunol?23，901-944(2005))。雖然這些表面結構的直接識別是先天免疫的一個基礎方面，但是調理作用容許通用巨噬細胞受體介導吞食，提高效率和使吞噬細胞的識別全集多樣化(Stuart和Ezekowitz，Immunity?22，539-550(2005))。吞食過程涉及多種配體-受體相互作用，而且現在清楚了多種調理素(包括免疫球蛋白、膠原凝集素、和補體成分)經由與巨噬細胞表面受體的相互作用來引導病原體內在化所需要的細胞活性(綜述見Aderem和Underhill，Annu?Rev?Immunol17，593-623(1999)；Underhill和Ozinsky，Annu?Rev?Immunol?20，825-852(2002))。雖然由種系基因編碼的天然免疫球蛋白能識別極其多種病原體，但是大多數調理性IgG是經由適應性免疫生成的，而且因此經由Fc受體的高效清除不是立即的(Carroll，Nat?Immunol?5，981-986(2004))。另一方面，補體快速識別病原體表面分子并使微粒準備好由補體受體來攝取(Brown，Infect?Agents?Dis?1，63-70(1991))。

補體由30種以上的血清蛋白質組成，它們調理極其多種病原體，用以被補體受體所識別。取決于級聯的初始觸發，可區別三種途徑(綜述見Walport，N?Engl?J?Med?344，1058-1066(2001))。所有這三種途徑共享活化中樞成分C3的共同步驟，但是它們依據識別的本質和導致C3活化的初始生化步驟而不同。經典途徑如下活化，抗體結合至病原體表面，其繼而結合C1q補體成分，引起一系列蛋白酶級聯，最終將C3切割成其活性形式C3b。凝集素途徑在碳水化合物基序受到凝集素蛋白質識別后被活化。至今，已經鑒定了此途徑的三個成員：結合甘露糖的凝集素(MBL)，SIGN-R1凝集素家族和ficolin(Pyz等，Ann?Med?38，242-251(2006))。MBL和ficolin都與絲氨酸蛋白酶有關，其像經典途徑中的C1那樣起作用，活化成分C2和C4，導致中樞C3步驟。旁路條件與經典條件和凝集素途徑二者形成對照，即它是由于內部C3酯與病原體表面上的識別基序的直接反應而被活化的。經由旁路途徑蛋白酶因子B和因子D的作用，初始C3結合活化性表面導致C3b沉積的快速擴大。重要的是，經由因子B和D的作用，通過經典途徑或凝集素途徑任一所沉積的C3b也能導致C3b沉積的擴大。在補體活化的所有三種途徑中，調理中的關鍵步驟是成分C3轉化成C3b。補體級聯的酶對C3的切割將硫酯暴露于親核攻擊，容許C3b經由硫酯結構域共價附著到抗原表面上。這是補體調理中的初始步驟。對所結合的C3b的后續蛋白水解生成iC3b、C3c和C3dg，即受到不同受體識別的片段(Ross和Medof，Adv?Immunol?37，217-267(1985))。此切割消除了C3b進一步擴大C3b沉積和活化補體級聯晚期成分(包括能夠指導膜破壞的膜攻擊復合物)的能力。然而，巨噬細胞的吞噬細胞受體優先識別C3b及其片段；由于酯鍵形成的通用性，C3介導的調理對于病原體識別是重要的(Holers等，Immunol?Today?13，231-236(1992))，而且各種C3降解產物的受體因此在宿主免疫應答中發揮重要作用。