[發明專利]雙靶生物傳感器細胞試驗

無效

• 申請號: 200980115574.0
• 申請日: 2009-03-04
• 公開（公告）號: CN102037357A
• 公開（公告）日: 2011-04-27
• 發明（設計）人: T·A·邦奇;方曄;E·特蘭
• 申請（專利權）人: 康寧股份有限公司
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50;C12Q1/02;G01N33/543;G01N33/74;G01N33/566
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 項丹;崔佳佳

要求在先提交的美國專利申請的權益

本申請要求2008年3月5日提交的美國臨時申請序列號61/068,266的權益。該文件的內容和本文述及的出版物、專利及專利文件的全部內容通過引用納入本文。

背景

本發明涉及，例如用于化合物篩選和化合物模式分析的細胞試驗所用的生物傳感器，例如共振波導光柵(RWG)生物傳感器和電阻抗生物傳感器。

概述

本發明提供用于化合物篩選和化合物模式分析，例如針對一種細胞類型中的兩種不同細胞靶標，或針對不同細胞類型的兩種不同細胞靶標的細胞試驗所用的方法和裝置。

附圖簡述

圖1A-1B顯示在本發明的各實施方式中，分別采用RWG生物傳感器和電子生物傳感器進行雙重或雙靶標特異性篩選的生物傳感器細胞試驗各方面的內容。

圖2A-2D顯示在本發明的各實施方式中，針對兩類G蛋白偶聯受體(GPCR)的示范性RWG生物傳感器細胞試驗。

圖3A-3C顯示在本發明的各實施方式中，針對兩類G蛋白偶聯受體的另一示范性RWG生物傳感器細胞試驗。

圖4顯示在本發明的各實施方式中，采用RWG生物傳感器的示范性雙重和靶標特異性篩選。

圖5A-5C顯示在本發明的各實施方式中，檢測A431細胞中的兩種內源性受體-β2-腎上腺素能受體和組胺H1受體的示范性光學生物反應器細胞試驗。

圖6A-6D顯示在本發明的各實施方式中，采用RWG生物傳感器的示范性雙重和靶標特異性篩選。

圖7A-7F顯示在本發明的各實施方式中，采用生物傳感器細胞試驗示范性篩選化合物文庫中的激動劑結果。

圖8顯示在本發明的各實施方式中，采用生物傳感器細胞試驗示范性篩選化合物文庫中的激動劑結果。

圖9顯示在本發明的各實施方式中，采用生物傳感器細胞試驗示范性篩選化合物文庫中的拮抗劑結果。

詳述

參考附圖(如果有的話)詳述本發明的各種實施方式。參考各種實施方式不是限制本發明的范圍，該范圍只由隨附的權利要求書限制。此外，本說明書中的實施例不是限制性的，僅是列出本發明許多可能的各實施方式中的一些。

定義

“試驗”、“測定”等術語指分析以測定，例如用外源性刺激，例如用候選配體化合物刺激后，細胞是否存在光學或生物阻抗反應、其量度、程度、動力學(kinetics)、或動態學(dynamics)類型。

“結合”、“連接”、“粘附”、“附著”、“粘附的”、“固定的”等術語通常指通過，例如物理吸附、化學鍵合等過程或它們的組合，而將(例如)本發明的表面修飾物質、增容劑、細胞、候選配體化合物等實體固定于表面。“細胞連接”、“細胞粘附”等術語，具體指通過(例如培養)使細胞與表面相互作用或結合，或使細胞與表面，例如生物傳感器表面相互作用。這種生物傳感器表面可以是未經修飾或經過修飾的，例如具有表面涂層、錨定材料、增容劑(例如，纖連蛋白、膠原、核纖層蛋白、明膠、聚賴氨酸等)等修飾，以促進細胞粘附和細胞生長。對于懸浮細胞，可以(例如)通過培育期間細胞的物理沉降或通過表面與細胞的相互作用，使細胞與生物傳感器檢測區接觸。可通過以下幾種方式實現這種表面-細胞相互作用，例如共價偶聯反應活性表面與基底細胞膜蛋白或分子、電荷為基礎的電子相互作用、傳感器表面-呈遞分子(例如，抗體、配體)與基底細胞表面分子結合等方法。

“粘附細胞”指維持與基材外表面結合、固定于其上或相接觸的細胞或細胞系或細胞系統，例如原核或真核細胞。此類細胞在培育后能經受洗滌和培養液更換過程而存活，而這些過程是許多細胞試驗的先決條件。“弱粘附細胞”指在細胞培養期間與基材表面相互作用或結合或接觸弱的細胞或細胞系或細胞系統，例如原核或真核細胞。然而，物理干擾方法，例如洗滌或培養液更換易使這些類型的細胞，例如人胚胎腎(HEK)細胞從基材表面脫離下來。“懸浮細胞”指優選在培養液中培養時不附著或粘附于基材表面的細胞或細胞系。“細胞培養”指原核或真核細胞在受控制條件下的生長過程。“細胞培養”不僅指培養多細胞真核生物的細胞，特別是動物細胞，而且指培養復雜的組織、器官等系統。

“細胞”等術語指通過半透膜與外部分界的小(通常微觀)原生質團，任選包含能單獨執行或與其它類似物質相互作用而執行生命功能的一個或多個核和各種其它細胞器，形成能獨立執行功能的活物質的最小結構單元，包括合成的細胞構造、細胞模型系統和類似的人造細胞系統。