[發明專利]肺炎球菌檢測方法

有效

• 申請號: 200980111519.4
• 申請日: 2009-03-31
• 公開（公告）號: CN101981452B
• 公開（公告）日: 2017-05-17
• 發明（設計）人: 赤松優;西條容子
• 申請（專利權）人: 大塚制藥株式會社
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;C07K16/14;C12N15/02
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司11227
• 代理人: 苗堃,金世煜

技術領域

本發明涉及用于對生物體中的肺炎球菌抗原進行檢測或定量的免疫學測定方法。

背景技術

肺炎球菌(Streptococcus pneumoniae)是作為社區獲得性肺炎或下呼吸道感染癥的病原菌檢出頻率最高的菌，不僅在日本而且在全世界范圍內都是患病率、死亡率高的病原菌之一。肺炎球菌感染癥不僅頻率高，而且容易演變成重癥，因此治療開始時選擇適當的抗菌藥是非常重要的。另外，從感染癥治療的原則來看，由于盡可能早期確定病原菌能夠早期地選擇準確的治療方法，因此與預后的改善、醫療成本的削減、防止耐藥菌的出現緊密相關，因而非常重要。從這些背景考慮，要求在感染早期的階段快速檢測肺炎球菌來源的抗原的診斷試劑。

關于肺炎球菌的結構，Sorensen等進行了詳細的報道(非專利文獻1)。莢膜(capsular)位于菌的最外側，莢膜上配位有稱為莢膜多糖的多糖抗原。根據該莢膜多糖的結構的不同，報道了數十種以上的血清型。另一方面，細胞壁(Cell wall)及細胞膜(Plasma membrane)依次位于莢膜的內側，細胞壁上配位有莢膜多糖(C-ps)，細胞膜上配位有稱為F抗原的磷壁酸或脂磷壁酸。已知C-ps是在所有肺炎球菌中保守的共同抗原，另外，據報道F抗原的多糖部分具有與C-ps相同的糖序列。

作為利用免疫測定方法的肺炎球菌的抗原檢測方法，以往報道了通過使用抗C-ps抗體的ELISA檢測痰液中的C-ps抗原的方法(非專利文獻2、非專利文獻3)、和通過以莢膜多糖為對象的免疫電泳法檢測血清中、尿中的抗原的方法(非專利文獻4、非專利文獻5)。

另外，作為現有的肺炎球菌檢測試劑盒，過去使用通過膠乳凝集法檢測腦脊液、血清、尿中的肺炎球菌抗原的試劑盒。認為該方法檢測的是莢膜多糖等多糖部分(非專利文獻6、非專利文獻7)。但是，使用膠乳凝集法 的試劑盒由于操作的復雜性和靈敏度的問題，目前幾乎不再使用。

目前，使用更簡便的檢測方法。Binax公司的尿中抗原快速檢測試劑盒(Binax NOW(注冊商標)肺炎球菌尿中抗原檢測)，通過免疫層析法檢測尿中的C-ps(專利文獻1)。該方法檢測的是尿中的抗原因此為非侵襲性，測定時間為15分鐘左右也很快速(非專利文獻8)。但是，在測定尿中抗原的情況下，由于肺炎球菌在治療后也長時間在尿中持續排出，因而存在產生假陽性的問題(非專利文獻9)。另外，在嬰幼兒的情況下，還存在采尿困難以及由于常住性的肺炎球菌的影響而產生假陽性的問題(非專利文獻10)。另外，對于該試劑盒，也有靈敏度稍低的批評(非專利文獻11)。

更近時期開發的肺炎球菌抗原檢測試劑盒(非專利文獻12)是通過使用抗C-ps多克隆抗體(兔)的免疫層析法快速檢測痰液或鼻腔、上咽部的拭子、或中耳潴留液、耳膿溢中的肺炎球菌抗原(C-ps)的試劑盒。該試劑盒與上述的尿中抗原診斷試劑盒相比靈敏度高，無需將拭子等臨床樣本進行濃縮操作即可利用，并且能夠從以往難以測定的中耳潴留液中進行測定。另外，與尿樣本不同，容易從嬰幼兒采取樣本。但是，對于中耳或副鼻竇來源的樣本等一部分樣本，該試劑盒的靈敏度也不能說是充分的，期望開發更高靈敏度的檢測方法。

如前所述，作為肺炎球菌的抗原檢測試劑盒，報道了檢測莢膜抗原及C-ps的試劑盒。其中，多樣性高的莢膜抗原需要準備與其多樣型相應的抗體，因此不適合作為簡易測定的對象。對于C-ps，從前述的現有檢測試劑盒的結果來看，也需要進一步提高靈敏度。

另一方面，F抗原迄今為止還未用于日常的臨床檢查。雖然有通過使用抗F抗原抗體的免疫學檢測方法檢測含有肺炎球菌抗原的細菌的報道(非專利文獻13～15)，但是這些方法存在在菌種間產生交叉反應或者有假陰性的危險等精度方面的問題。

專利文獻1：美國專利第6824997號

非專利文獻1：Sorensen，Danish Medical Bulletin 42：47-53(1995)

非專利文獻2：Holmberg et al.，J.Clin.Microbiol.22：111-115(1985)

非專利文獻3：Sjogren et al.，Diagn.Microbiol.Infect.Dis. 6：239-248(1987)

非專利文獻4：Coonrod et al.，J.Lab.Clin.Med.81：778-786(1973)

非專利文獻5：Feigin et al.，The Journal of Pediatrics 89：773-775(1976)