[發(fā)明專利]用于核酸測試的非競爭性內(nèi)部對照物無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 200980109445.0 | 申請日： | 2009-03-19 |
| 公開（公告）號： | CN101978074A | 公開（公告）日： | 2011-02-16 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | J·德特默;X·蔣;M·樂;D·謝爾曼 | 申請（專利權(quán)）人： | 西門子醫(yī)療保健診斷公司 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 中國專利代理(香港)有限公司 72001 | 代理人： | 周鐵;林森 |
| 地址： | 美國*** | 國省代碼： | 美國;US |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 用于 核酸 測試 競爭性 內(nèi)部 對照 | ||
1.一種用于核酸測試(NAT)的非競爭性內(nèi)部對照物，包含從選自Methanobacterium?thermoautrophicum(MET)或玉蜀黍(Zea?mays)的生物體獲得的核酸。
2.權(quán)利要求1的非競爭性內(nèi)部對照物，其中所述核酸是DNA。
3.權(quán)利要求2的非競爭性內(nèi)部對照物，其中所述NAT選自以下構(gòu)成的組：甲型流感、乙型流感、副流感病毒1到4(PIV-1到PIV-4)、A型呼吸道合胞體病毒(RSV?A)、RSV?B、人類偏肺病毒(hMPV)、乙型肝炎病毒(HBV)、沙眼衣原體(CT)和Neisseria?gonorrhea(GC)。
4.權(quán)利要求1的非競爭性內(nèi)部對照物，其中所述核酸是RNA。
5.權(quán)利要求4的非競爭性內(nèi)部對照物，其中所述診斷NAT選自以下構(gòu)成的組：丙型肝炎病毒(HCV)、人類免疫缺陷病毒I(HIV-1)和嚴重急性呼吸綜合征(SARS)。
6.權(quán)利要求1的非競爭性內(nèi)部對照物，其中所述核酸包括至少兩個引物結(jié)合位點和至少一個探針結(jié)合位點。
7.一種制備用于核酸測試(NAT)的非競爭性內(nèi)部對照物的方法，包括步驟：
(a)從Methanobacterium?thermoautrophicum(MET)提取基因組DNA；
(b)利用具有至少兩個限制性內(nèi)切酶位點和目標(biāo)特異性序列的正向和反向引物，從步驟(a)的基因組DNA產(chǎn)生擴增子；
(c)通過連接步驟(b)的擴增子和載體序列產(chǎn)生質(zhì)粒，所述載體序列具有啟動子序列和與所述擴增子的限制性內(nèi)切酶位點相同的限制性內(nèi)切酶位點；
(d)用與步驟(b)和(c)的限制性內(nèi)切酶位點相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶消化所述質(zhì)粒來產(chǎn)生MET內(nèi)部對照DNA。
8.權(quán)利要求7的方法，進一步包括步驟：
(e)從步驟(e)的DNA制備MET內(nèi)部對照RNA。
9.權(quán)利要求7的方法，其中步驟(b)和(d)的所述至少兩個限制性內(nèi)切酶位點相應(yīng)于限制性內(nèi)切酶XhoI和SpeI的序列。
10.權(quán)利要求7的方法，其中所述步驟(b)的正向引物具有SEQID?NO：3的序列，步驟(b)的反向引物具有SEQ?ID?NO：4的序列。
11.權(quán)利要求7的方法，其中步驟(c)的啟動子序列是T7啟動子序列。
12.權(quán)利要求7的方法，其中所述MET內(nèi)部對照DNA被用作用于以下疾病狀態(tài)的DNA核酸診斷測試中的內(nèi)部對照物：甲型流感、乙型流感、副流感病毒1到4(PIV-1到PIV-4)、A型呼吸道合胞體病毒(RSV?A)、RSV?B、人類偏肺病毒(hMPV)、乙型肝炎病毒(HBV)、沙眼衣原體(CT)和Neisseria?gonorrhea(GC)。
13.權(quán)利要求8的方法，其中所述MET內(nèi)部對照RNA被用作用于以下疾病狀態(tài)的RNA核酸診斷測試中的內(nèi)部對照物：丙型肝炎病毒(HCV)、人類免疫缺陷病毒I(HIV-1)和嚴重急性呼吸綜合征(SARS)。
14.一種制備用于核酸測試(NAT)的非競爭性內(nèi)部對照物的方法，包括步驟：
(a)從玉蜀黍(玉米)提取基因組DNA；
(b)利用具有至少兩個限制性內(nèi)切酶位點和目標(biāo)特異性序列的正向和反向引物，從步驟(a)的基因組DNA產(chǎn)生擴增子；
(c)通過連接步驟(c)的擴增子和載體序列產(chǎn)生質(zhì)粒，所述載體序列具有啟動子序列和與所述擴增子的限制性內(nèi)切酶位點相同的限制性內(nèi)切酶位點；
(d)用與步驟(b)和(c)的限制性內(nèi)切酶位點相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶消化所述質(zhì)粒來產(chǎn)生玉米內(nèi)部對照DNA。
15.權(quán)利要求14的方法，進一步包括步驟：
(e)從步驟(e)的DNA制備玉米內(nèi)部對照RNA。
16.權(quán)利要求14的方法，其中步驟(b)和(d)的所述至少兩個限制性內(nèi)切酶位點相應(yīng)于限制性內(nèi)切酶XhoI和SpeI的序列。
17.權(quán)利要求14的方法，其中步驟(d)的啟動子序列是T7啟動子序列。
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