[發明專利]聚乙二醇化胰島素樣生長因子測定

無效

• 申請號: 200980108314.0
• 申請日: 2009-03-31
• 公開（公告）號: CN101965516A
• 公開（公告）日: 2011-02-02
• 發明（設計）人: K·朗;A·肖布馬爾;J·施萊彭;T·施洛特豪爾
• 申請（專利權）人: 弗·哈夫曼-拉羅切有限公司
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74;G01N33/543;G01N33/58
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 黃革生;陳迎春

1.檢測聚乙二醇化胰島素樣生長因子的免疫測定，包含捕獲抗體和示蹤抗體，其特征在于

a)所述捕獲抗體是單克隆抗聚乙二醇抗體，

b)所述聚乙二醇化胰島素樣生長因子作為與洋地黃毒苷化的胰島素樣生長因子結合蛋白的復合體而得到檢測，

c)所述示蹤抗體是單克隆抗洋地黃毒苷抗體，

其中所述聚乙二醇化胰島素樣生長因子與所述洋地黃毒苷化的胰島素樣生長因子結合蛋白的孵育為室溫下12至24小時，所述洋地黃毒苷化的胰島素樣生長因子結合蛋白的濃度為5.0μg/ml或更低。

2.根據權利要求1的免疫測定，其特征在于

a)所述抗聚乙二醇抗體綴合到固相，并且

b)所述抗洋地黃毒苷抗體綴合到可檢測標簽。

3.根據權利要求2的免疫測定，其特征在于所述綴合是通過共價鍵的綴合。

4.根據權利要求2或3中任一項的免疫測定，其特征在于所述可檢測標簽選自酶、抗原、熒光基團、化學發光基團、電化學發光基團和金屬螯合物復合體。

5.根據前述任一項權利要求的免疫測定，其特征在于所述聚乙二醇化胰島素樣生長因子是聚乙二醇化胰島素樣生長因子I或其聚乙二醇化變體。

6.根據前述任一項權利要求的免疫測定，其特征在于所述胰島素樣生長因子結合蛋白是胰島素樣生長因子結合蛋白4。

7.根據前述任一項權利要求的免疫測定，其特征在于所述聚乙二醇化胰島素樣生長因子與所述洋地黃毒苷化胰島素樣生長因子結合蛋白的孵育為18至22小時。

8.根據前述任一項權利要求的免疫測定，其特征在于所述聚乙二醇化胰島素樣生長因子與所述洋地黃毒苷化胰島素樣生長因子結合蛋白的孵育步驟中，所述洋地黃毒苷化胰島素樣生長因子結合蛋白的濃度為0.1μg/ml至5.0μg/ml。

9.確定樣品中聚乙二醇化胰島素樣生長因子的方法，包括下述步驟：

a)提供待分析的樣品，

b)將綴合到固相的抗聚乙二醇抗體與所述樣品孵育，從而形成抗聚乙二醇抗體/聚乙二醇化胰島素樣生長因子復合體，

c)將b)中形成的所述復合體與洋地黃毒苷化胰島素樣生長因子結合蛋白4在室溫下孵育12至24小時，從而形成復合體，其包含b)中形成的復合體，所述洋地黃毒苷化的胰島素樣生長因子結合蛋白4的濃度為5.0μg/ml或更低，

d)將c)中形成的所述復合體與辣根過氧化物酶綴合的抗洋地黃毒苷抗體孵育，從而形成復合體，其包含c)中形成的復合體，

e)通過將d)中形成的復合體與ABTS孵育并通過有色產物的形成確定聚乙二醇化胰島素樣生長因子。

10.根據權利要求9的方法，其特征在于在步驟b)、c)、和/或d)之后進行洗滌步驟。

11.根據權利要求9或10的方法，其特征在于所述聚乙二醇化胰島素樣生長因子是聚乙二醇化胰島素樣生長因子I或其聚乙二醇化變體。

12.根據權利要求9至11中任一項的方法，其特征在于所述聚乙二醇化胰島素樣生長因子與所述洋地黃毒苷化胰島素樣生長因子結合蛋白4的孵育為18至22小時。

13.根據權利要求9至12中任一項的方法，其特征在于所述聚乙二醇化胰島素樣生長因子與所述洋地黃毒苷化胰島素樣生長因子結合蛋白4的孵育中，所述洋地黃毒苷化胰島素樣生長因子結合蛋白4的濃度為0.1μg/ml至5.0μg/ml。

14.根據權利要求9的方法在患者隨訪中的用途，該患者施用了聚乙二醇化胰島素樣生長因子I或其聚乙二醇化變體。

15.確定樣品中聚乙二醇化胰島素樣生長因子的試劑盒，包含：

a)鏈霉抗生物素包被的微量滴定板，

b)綴合到生物素的抗聚乙二醇抗體，

c)綴合到辣根過氧化物酶的抗洋地黃毒苷抗體，

d)洋地黃毒苷化胰島素樣生長因子結合蛋白。

16.根據權利要求15的試劑盒，其特征在于b)和c)中所述抗體是單克隆抗體。

17.根據權利要求15或16的試劑盒，其特征在于所述抗聚乙二醇抗體是IgM類型。