[發(fā)明專利]綴合的因子Ⅷ分子

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200980106738.3
• 申請日: 2009-02-26
• 公開（公告）號: CN101965200A
• 公開（公告）日: 2011-02-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: S·德弗里斯;G·博爾特;B·B·S·范達(dá)爾;L·蒂姆;H·R·斯特尼克;T·D·斯蒂恩斯特魯普
• 申請（專利權(quán)）人: 諾沃-諾迪斯克有限公司
• 主分類號: A61K47/48
• 分類號: A61K47/48;A61P7/04
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 權(quán)陸軍;郭文潔

發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及綴合的凝固因子VIII分子。具體地，本發(fā)明涉及具有改變的循環(huán)半衰期的綴合的因子VIII分子。

發(fā)明背景

A型血友病是由凝固因子VIII(FVIII)活性的缺乏或功能障礙造成的一種遺傳性出血障礙。臨床表現(xiàn)不是在初級止血—正常形成血凝塊—而是由于缺乏次級凝血酶形成所導(dǎo)致的凝塊不穩(wěn)定。通過靜脈內(nèi)注射從血液分離的或重組生產(chǎn)的凝固因子FVIII，治療該疾病。

流行的治療推薦正在從傳統(tǒng)的在要求時(shí)(on-demand)治療轉(zhuǎn)向預(yù)防。內(nèi)源的FVIII的循環(huán)半衰期是12-14小時(shí)，因而每周需要進(jìn)行幾次預(yù)防性治療，以使患者得到實(shí)際上無癥狀的生活。對于許多人，尤其是兒童和年輕人，靜脈內(nèi)施用伴有顯著的不便和/或疼痛。因而本領(lǐng)域需要新穎的具有因子VIII活性的因子VIII產(chǎn)品，它們優(yōu)選地在結(jié)構(gòu)上是同質(zhì)的，優(yōu)選地是安全的，且優(yōu)選地具有顯著延長的循環(huán)半衰期，以減少每周施用因子VIII的次數(shù)。此外，本領(lǐng)域需要相對簡單的得到和生產(chǎn)這種分子的方法。

本領(lǐng)域已知，為了延長循環(huán)半衰期，向因子VIII加入聚乙二醇(PEGylation)。但是，這是得到具有同質(zhì)結(jié)構(gòu)以及顯著提高的循環(huán)半衰期的安全產(chǎn)品的障礙。可得到的生產(chǎn)綴合的因子VIII分子的方法經(jīng)常是費(fèi)力的，和/或傾向于導(dǎo)致低得率和/或在結(jié)構(gòu)上不同質(zhì)的產(chǎn)品。在WO2008011633中已經(jīng)暗示了人工改造的O-聯(lián)糖基化位點(diǎn)用于得到治療蛋白的應(yīng)用，所述治療蛋白具有延長的治療蛋白循環(huán)半衰期，但是，其中沒有公開綴合的因子VIII分子。

發(fā)明概述

在第一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有改變的循環(huán)半衰期的B結(jié)構(gòu)域截短的因子VIII分子，所述分子在截短的B結(jié)構(gòu)域中通過O-聯(lián)寡糖與親水聚合物共價(jià)綴合，其中因子VIII激活導(dǎo)致共價(jià)綴合的側(cè)基的去除。

在其它方面，本發(fā)明另外涉及用于得到這種分子的方法，這種分子的用途和包含這種分子的藥物組合物。

因而，提供了具有改變的循環(huán)半衰期的綴合的因子VIII分子，其中綴合的側(cè)基(例如親水聚合物)在激活后去除。根據(jù)本發(fā)明的分子優(yōu)選地在結(jié)構(gòu)上—至少在親水聚合物在截短的B結(jié)構(gòu)域中的位置這方面—是同質(zhì)的，且優(yōu)選地具有有利的安全概況。同樣，本文另外提供了相對簡單的用于得到這種分子的方法。優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明的激活的因子VIII分子類似于內(nèi)源激活的因子VIII。

發(fā)明詳述

定義：

因子VIII分子：FVIII/因子VIII是一種主要由肝細(xì)胞產(chǎn)生的大的、復(fù)雜的糖蛋白。FVIII由2351個(gè)氨基酸組成，包括信號肽，且含有幾個(gè)根據(jù)同源性定義的不同結(jié)構(gòu)域。存在3個(gè)A-結(jié)構(gòu)域，1個(gè)獨(dú)特的B-結(jié)構(gòu)域和2個(gè)C-結(jié)構(gòu)域。結(jié)構(gòu)域次序可以列成NH2-A1-A2-B-A3-C1-C2-COOH。FVIII在血漿中作為在B-A3邊界處分開的兩條鏈進(jìn)行循環(huán)。鏈通過二價(jià)金屬離子結(jié)合進(jìn)行連接。A1-A2-B鏈稱作重鏈(HC)，而A3-C1-C2稱作輕鏈(LC)。

內(nèi)源的因子VIII分子作為一群具有各種大小的B結(jié)構(gòu)域的分子在體內(nèi)循環(huán)。在體內(nèi)可能發(fā)生的是，B結(jié)構(gòu)域的逐漸酶促去除，從而產(chǎn)生一群具有各種大小的B結(jié)構(gòu)域的分子。一般認(rèn)為，隨同凝血酶激活發(fā)生在位置740處的切割，由此去除B-結(jié)構(gòu)域的最后一部分。但是，不能排除的是，其中例如在位置740的切割位點(diǎn)已經(jīng)受損的因子VIII變體可能是有活性的。

本文使用的“因子VIII”或“FVIII”是指一種人血漿糖蛋白，它是內(nèi)在的凝固途徑的一個(gè)成員，且是血液凝固所必需的。“天然的FVIII”是在SEQ?ID?NO.1(氨基酸1-2332)中所示的全長人FVIII分子。B-結(jié)構(gòu)域跨SEQ?ID?NO?1中的氨基酸741-1648。

SEQ?ID?NO?1：