[發明專利]腐蝕穩定性色譜分析用配體

無效

• 申請號: 200911000241.1
• 申請日: 2009-12-23
• 公開（公告）號: CN101775069A
• 公開（公告）日: 2010-07-14
• 發明（設計）人: N·卞;N·索伊斯;S·斯佩克特;K·萊文
• 申請（專利權）人: 米利波爾公司
• 主分類號: C07K14/31
• 分類號: C07K14/31;C07K1/22;C07K16/00;G01N30/50;G01N33/566
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司 72002
• 代理人: 左路;林曉紅

1.一種堿穩定性色譜分析用配體，所述配體包含兩個或更多個葡萄球菌A蛋白(SpA)或其功能性片段或變體的B結構域或者兩個或更多個SpA或其功能性片段或變體的Z結構域。

2.一種堿穩定性色譜分析用配體，所述配體包含兩個或更多個葡萄球菌A蛋白(SpA)或其功能性片段或變體的B結構域或者兩個或更多個SpA或其功能性片段或變體的Z結構域，其中所述兩個或更多個B結構域或者兩個或更多個Z結構域在色譜分析樹脂的多于一個位點上附著于樹脂。

3.權利要求1或者權利要求2的堿穩定性色譜分析用配體，其中所述配體包含三個或更多個SpA?B結構域或者三個或更多個SpA?Z結構域。

4.權利要求1或者權利要求2的堿穩定性色譜分析用配體，其中所述配體包含四個或更多個SpA?B結構域或者四個或更多個SpA?Z結構域。

5.權利要求1或者權利要求2的堿穩定性色譜分析用配體，其中所述配體包含五個或更多個SpA?B結構域或者五個或更多個SpA?Z結構域。

6.權利要求1或者權利要求2的堿穩定性色譜分析用配體，其中所述配體包含六個或更多個SpA?B結構域或者六個或更多個SpA?Z結構域。

7.權利要求1或者權利要求2的堿穩定性色譜分析用配體，其中所述配體包含七個或更多個SpA?B結構域或者七個或更多個SpA?Z結構域。

8.前述權利要求任一項的堿穩定性色譜分析用配體，進一步包括至少一個氨基酸的突變以改變與Fab的結合。

9.權利要求8的堿穩定性色譜分析用配體，其中所述突變包括在第29位丙氨酸取代甘氨酸。

10.一種色譜分析基質，包含權利要求1-9任一項所述的配體。

11.一種從樣品中親和純化一種或多種免疫球蛋白的方法，所述方法包括如下步驟：

(a)提供含有一種或多種免疫球蛋白的樣品；

(b)在一種或多種免疫球蛋白同基質結合的條件下，將樣品與權利要求10的基質接觸；和

(c)通過在適宜的條件下洗脫而回收一種或多種結合的免疫球蛋白。

12.權利要求1-9任一項所述的配體，其中所述配體在0.5M?NaOH中溫育5小時后，或10小時后，或15小時后，或20小時后，保留其至少95％的結合能力。

13.權利要求1-9任一項所述的配體，其中所述配體與wtSpA相比能夠結合至少1.5倍，或2倍，或3倍，或更多的IgG。

14.一種堿穩定性色譜分析用配體，包含一個或多個分離的葡萄球菌A蛋白E、D、A、B、C或Z結構域，所述一個或多個分離的結構域包含位于n+1位的一個或多個突變為除半胱氨酸(C)、絲氨酸(S)、丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、天冬酰胺(N)、或谷氨酰胺(Q)之外的任何天然存在的氨基酸的氨基酸殘基，其中所述n代表天冬酰胺。

15.一種堿穩定性色譜分析用配體，包含一個或多個分離的葡萄球菌A蛋白E、D、A、B、C或Z結構域，所述一個或多個分離的結構域包含位于n+1位的一個或多個突變為選自精氨酸(R)、天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)、組氨酸(H)、異亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、賴氨酸(K)、甲硫氨酸(M)、苯丙氨酸(F)、脯氨酸(P)、蘇氨酸(T)、色氨酸(W)、酪氨酸(Y)和纈氨酸(V)組成的組中的氨基酸的氨基酸殘基，其中n代表天冬酰胺。

16.權利要求14或15所述的配體，其中n是第23位的天冬酰胺。

17.一種腐蝕穩定性親和色譜分析基質，包含三個或更多個，或者四個或更多個，或者五個或更多個，或者六個或更多個，或者七個或更多個通過多位點附著而附著于固體支持物上的SpA?B結構域或Z結構域。