[發明專利]一種高純度光甘草定的分離純化方法

無效

• 申請號: 200910311302.X
• 申請日: 2009-12-13
• 公開（公告）號: CN101830906A
• 公開（公告）日: 2010-09-15
• 發明（設計）人: 董維珍;郭建華;文煥松;劉丁;夏柯
• 申請（專利權）人: 成都普思生物科技有限公司
• 主分類號: C07D493/04
• 分類號: C07D493/04
• 代理公司: 成都九鼎天元知識產權代理有限公司 51214
• 代理人: 劉雪蓮;劉明芳

技術領域

本發明涉及一種從豆科植物光甘草中分離純化光甘草定的方法，屬于植物中單體活性成分的分離純化技術領域。

背景技術

甘草屬光果甘草(洋甘草)Glycyrrhiza?glabra?L.主產于我國東北，華北、西北各省區，生于河岸階地，溝邊、田邊、路旁，歐洲、地中海區域、哈薩克斯坦、烏茲別克斯坦、土庫曼斯坦、吉爾吉斯斯坦、塔吉克斯坦、俄羅斯西伯利亞地區以及蒙古亦產。光甘草中的黃酮類化合物除了有明顯的抗潰瘍、抗菌消炎、降血脂外，還有明顯的清除自由基和抗氧化作用，其中光甘草定(Glabridin)是光果甘草中的主要黃酮類成分之一，其分子式為C₂₀H₂₀O₄，分子量為324.3704，結構式如式I所示。光甘草定既能抑制酪氨酸酶的活性，又能抑制多巴色素互變酶和DHICA氧化酶的活性，在細胞色素P450/NADPH氧化系統中顯示出很強的抗自由基氧化作用，能明顯抑制體內新陳代謝過程中所產生的自由基、以免受對氧化敏感的生物大分子(低密度脂蛋白LDL，DNA)和細胞壁等被自由基氧化損傷，從而可以防治與自由基氧化有關的某些病理變化，如動脈粥樣硬化、細胞衰老等。故光甘草定被認為是一種快速、高效、安全、綠色的天然美白化妝品添加劑，目前已在化妝品美白領域得到廣泛應用。然而，由于光甘草定在光果甘草中的含量約為0.1～0.3％，因此得到高純度的光甘草定單體的工藝流程復雜，成本昂貴。目前，國內外多采取反復硅膠柱層析等傳統方法分離純化光甘草定單體，產品質量和數量都難以滿足市場需求，且試劑消耗大，產品收率低。中國專利200410079233.1公開了一種光甘草產品的生產方法，該方法用有機溶劑提取光甘草粗品后上硅膠柱，用氯仿、丙酮梯度洗脫，收集目標溶液減壓濃縮，真空干燥后得光甘草定含量為40％的黃棕色粉末。該方法使用了有毒的有機溶劑，操作繁復，所得產品純度較低。中國專利200510023860.8公開了一種高純度光甘草定的生產方法，該方法將光甘草提取液超濾后再進一步用高分子樹脂吸附、淋洗液淋洗及重結晶精制，可獲得純度90％以上的光甘草定，但產品的純度難以進一步提高，且該方法使用了超濾技術和高分子樹脂分離方法，操作繁復、成本較高且產品收率低。隨著科技的進步，近年來國際市場對該類產品的質量要求有所提高，對光甘草定單體成分的含量也有所要求，因而需要提供一種成本低廉、產品純度高的光甘草定分離純化方法。

式I

發明內容

本發明的目的在于提供一種高純度光甘草定單體的分離純化方法，此方法不但可實現光甘草定單體的高效分離，而且工藝穩定，成本低廉，可大量制備得到純度大于98％的單體。

本發明所采用的技術方案如下：

一種高純度光甘草定的分離純化方法，包括以下步驟：

(1)、有效部位的提取：取光甘草藥材，用體積百分比濃度為20％～95％的乙醇提取3次，提取溫度為30℃～60℃，提取時間分別為3、2、1h，合并提取液，在40℃～50℃的溫度下減壓濃縮，得提取物浸膏；以防光甘草定受熱分解；

(2)、有效部位的富集及除雜：提取物浸膏用水懸浮后加入等體積乙酸乙酯、二氯甲烷或三氯甲烷萃取3次或3次以上，至水相中不能檢出光甘草定為止，在40℃～50℃的溫度下濃縮回收乙酸乙酯、二氯甲烷或三氯甲烷至干，得光甘草定粗品；

光甘草定粗品用水分散后過聚酰胺柱層析或大孔樹脂D101柱層析分離除雜，得光甘草定樣品：光甘草定粗品分散液吸附后聚酰胺柱后依次用水、20％甲醇、50％甲醇、95％甲醇洗脫，分別收集洗脫液，HPLC檢測，80％甲醇洗脫液中包含產品，收集80％甲醇洗脫液，濃縮至干；光甘草定粗品分散液吸附于大孔樹脂D101柱后依次用水、10％乙醇、30％乙醇、50％乙醇洗脫，分別收集洗脫液，HPLC檢測，50％乙醇洗脫液中包含產品，收集50％乙醇洗脫液，濃縮至干；

(3)、光甘草定單體的高效液相色譜分離：將步驟(2)所得光甘草定產品用80％-95％甲醇溶解，利用制備型高效液相色譜柱，對光甘草定甲醇溶液進行高效分離，以乙腈水溶液或甲醇水溶液作為流動相，流速100～300mL/min，HPLC在線檢測，針對性收集光甘草定單體的制備溶液，收集產品純度98％以上的段落，于40℃～50℃溫度下減壓回收濃縮至干，得淡黃粉末狀的光甘草定單體；

(4)、制備所得單體溶液的處理及產品干燥：將步驟(3)所得光甘草定單體干品分別用20倍量(g/mL)正己烷、石油醚或甲苯在50℃下溶解為飽和溶液，4℃冰箱靜置析晶，收集晶體干燥至恒重，得結晶純度98.5％以上的光甘草定單體。