[發(fā)明專利]從家蠅幼蟲中誘導(dǎo)并提取金屬硫蛋白的方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910308720.3
• 申請(qǐng)日: 2009-10-24
• 公開（公告）號(hào): CN101696241A
• 公開（公告）日: 2010-04-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孟慶煜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 孟慶煜
• 主分類號(hào): C07K14/825
• 分類號(hào): C07K14/825;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/16
• 代理公司: 大慶市遠(yuǎn)東專利商標(biāo)事務(wù)所 23202
• 代理人: 周英華

1.從家蠅幼蟲中誘導(dǎo)并提取金屬硫蛋白的方法，其操作步驟如下：

a、以麥麩、水、10％EM復(fù)合菌群和含有鋅、銅、鉻復(fù)合離子誘導(dǎo)劑為原料，常溫發(fā)酵10～50小時(shí)制成培養(yǎng)基；

b、取家蠅的卵植入a步驟制得的培養(yǎng)基內(nèi)，溫度控制在30～35攝氏度，二十四小時(shí)后在培養(yǎng)基表面均勻噴灑5％濃度的相當(dāng)于培養(yǎng)基總量10％的Cd2+、Zn2+、Cu2+金屬離子誘導(dǎo)劑，培養(yǎng)4～6天，即制得家蠅幼蟲蛋白原料；

c、取經(jīng)b步驟培養(yǎng)的幼蟲在4～20攝氏度純凈水中漂洗2次，再放入20～50攝氏度、10％過氧化氫溶液浸泡10～120分鐘；

d、將經(jīng)c步驟處理的幼蟲在無菌水中漂洗30分鐘，置于離心干燥機(jī)中干燥3～20分鐘，取出置于-30～-70攝氏度下冷凍保存；

e、取經(jīng)d步驟處理的家蠅幼蟲蛋白原料投入到高速均漿機(jī)中，按照投入原料的1∶1添加常溫甘氨酸緩沖液制成均漿液，甘氨酸緩沖液的PH值7～9；濃度0.1～2mol/L；

f、再將e步驟得到的混合液進(jìn)行0.1～0.45靘濾膜過濾，濾液濃度為1～10g/mL，膜過濾蛋白分子量12000～15000Da溶液；

g、將經(jīng)f步驟制得的溶液進(jìn)行模擬移動(dòng)床色譜分離，洗脫泵流量0～1000mL/min，壓力0～10Mpa；進(jìn)樣泵流量0～30mL/min，壓力0～8Mpa；萃取泵流量0～100mL/min，壓力0～10MPa；工作溫度20～25攝氏度；模擬移動(dòng)床色譜參數(shù)：解吸段4根柱、精制段4根柱、吸附段4根柱，進(jìn)樣流速Uf＝8～12mL/min，洗脫泵流速Ud＝340～380mL/min，萃取液流速Ue＝230～250mL/min，殘余液流速Ur＝118～142mL/min，切換時(shí)間ts＝14～18min；

h、將經(jīng)g步驟處理的殘余液蛋白分子量5500～6500Da，注入真空濃縮罐內(nèi)，經(jīng)減壓濃縮含水1～50％后，再進(jìn)行真空凍干機(jī)凍干20小時(shí)，即制成金屬硫蛋白產(chǎn)品。

2.如權(quán)利要求1所述的從家蠅幼蟲中誘導(dǎo)并提取金屬硫蛋白的方法，其特征在于色譜柱填料及流動(dòng)相選擇填料為反相硅膠ODS，填料粒度30～40um，洗脫流動(dòng)相為乙醇與水的混合物，乙醇和水的體積比為5∶5。