[發明專利]安全、高效食用菌主培養基料的制作方法

無效

• 申請號: 200910307863.2
• 申請日: 2009-09-28
• 公開（公告）號: CN101665373A
• 公開（公告）日: 2010-03-10
• 發明（設計）人: 王光文
• 申請（專利權）人: 王光文
• 主分類號: C05F11/00
• 分類號: C05F11/00;C12N9/42;C12N9/26;C12N9/24;C12N1/20;C12R1/645;C12R1/38
• 代理公司: 岳陽市科明專利事務所
• 代理人: 彭乃恩;陳慶元

技術領域

本發明涉及人工栽培養食用菌的主培養基料，特別是指一種安全、高效食用菌主培養基料的制作方法。

背景技術

目前在食用菌生產中，主要是利用農作物秸桿及農產品加工副產物作為主培養基料，但絕大多數農作物秸桿和農產品加工副產物如棉桿、棉子殼、稻草、玉米桿等，木質素、纖維素含量高，難于被食用菌代謝利用，造成生物轉化率低、生產周期長；另一方面是農作物秸桿和農產品加工副產物中存在較高的農藥殘留，給食用菌生產帶來了極大的產品質量安全風險。

發明內容

本發明的目的是針對目前人工栽培食用菌主培養基料在生產前不作脫毒和降解處理，而直接在生產中使用所帶來的農藥殘留風險及生物轉化率低、可降解資源浪費嚴重的問題進行創新，利用生物工程技術對粗纖維、木質素含量高的農作物秸桿及農產品加工副產物進行生物酶解和生物降解農藥殘留而制作的安全、高效食用菌主培養基料。

本發明制作方法包括以下步驟：

(1)選備料

選取潔凈、干燥的原料，將原料粉碎處理完后裝入發酵裝置，然后加入原料重量40-60％的自來水，攪拌均勻。

(2)生物酶解高分子物質

將制備好的復合粗酶液，按上述原料重量10％的用量加入裝有原料的發酵裝置中，并攪拌均勻，45℃保溫酶解8-12hrs，經檢測其粗纖維、木質素含量在15-20％即可。

(3)生物降解農藥殘留

經第(2)步驟生物酶解完畢后，向發酵裝置中充入蒸汽，當料溫升至100℃時，保溫45-60mins，后冷凝至35℃，再按原料重量10％加入已制備好的降解農藥殘留復合菌種，在30-35℃保溫發酵36-48hrs，期間間歇補入無菌氧，使DO≥4.5，并不斷攪拌，其轉速為：120-160轉/min。

(4)干燥得成品

將經過第(3)步驟發酵好的料液取出，置于干燥設施中于80℃溫度下，通風干燥至含水量低于13％，經檢測合格后即得成品。

本發明復合粗酶液的制備包括以下步驟：

(1)菌種

制備復合粗酶液選用的菌種為：黃孢原毛平革菌和褐色絲膜菌、糙皮側耳，其比例為1∶1∶1。

(2)制種用培養基：PDB液體培養基，即PDA培養基去掉瓊脂粉成份。

(3)發酵用固體培養基

a、培養基組成

30％棉子殼、30％棉桿、6％谷殼、15％稻草、18.8％麩皮、0.1％酵母膏和0.1％的硫酸銨。

b、培養基配置

將棉桿、稻草粉碎至2cm左右，再按比例稱取除酵母膏和硫酸銨以外的各成份混合均勻后膨化處理，將膨化后的原料加入其重量50％的自來水，其中醇母膏和硫酸銨成份溶解在水中，攪勻，蒸煮60分鐘。

(4)發酵用菌種制作

a、一級搖瓶種子培養

取各菌種的試管斜面種，按比例挑取1-2環，接入500ml三角瓶中，其中三角瓶中裝滅菌PDB液100ml，35℃，搖床培養5-7天。

b、二級搖瓶種子培養

5L三角瓶裝1L培養液，滅菌冷卻后按10％種量接入一級搖瓶種子35℃搖床培養3天。

c、種子罐種子培養

50升種子罐，裝35升PDB培養液，滅菌冷卻后按10％種量接入二級搖瓶種子35℃下，通氣、攪拌，其中通氣量為1∶0.3，攪拌轉速為160-180轉/分，培養48小時。

d、發酵培養

500L發酵裝置裝PDB培養液350L，滅菌冷卻后，按10％種量接入種子罐種子。35℃下通氣、攪拌培養48小時即得固體發酵用菌種，其中通氣量為1∶0.3，攪拌轉速為160-180轉/分。

(5)固體發酵制備復合酶

按(3)配好的固體培養基冷卻至35℃后，按10％種量接入已制備的發酵用菌種，35℃下培養8-12hrs，期間攪拌，轉速120-160轉/分，后升溫至38-40℃下，靜置培養120-140hrs。

(6)復合粗酶液提取

發酵完成后，向發酵裝置中注入無菌去離子水，其量與發酵料比為1.5∶1，攪拌提取2-3hrs，靜置，取清液即得復合粗酶液；其中復合粗酶液中經測定其成分及其組成為：木質素酶≥50％、纖維素酶≥25％、半纖維素酶≥20％，果膠酶≥3％；其中木質素酶酶活力單位≥1500u/L。

本發明降解農藥殘留復合菌種的制備包括以下步驟：

(1)復合菌種及其組成比

光合細菌∶CDS-1∶EAYF-1∶BSYF-2∶施氏假單胞菌＝2-5∶1∶1∶1∶1；

(2)復合菌種生長培養基

復合菌生長培養基(g/L)