[發明專利]用膠體金免疫層析試驗檢測伏馬毒素的方法

無效

• 申請號: 200910307796.4
• 申請日: 2009-09-27
• 公開（公告）號: CN101661043A
• 公開（公告）日: 2010-03-03
• 發明（設計）人: 嚴亞賢;王君;王元凱;孫建和
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 上海交達專利事務所
• 代理人: 王錫麟;王桂忠

1、一種用膠體金免疫層析試驗快速檢測伏馬毒素的方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一，將伏馬毒素半抗原通過戊二醛法分別與KLH和OVA偶聯；

步驟二，利用步驟一所得伏馬毒素KLH偶聯物，采用常規方法制備抗伏馬毒素的單克隆抗體；

步驟三，用檸檬酸三鈉還原法制備40nm的膠體金，用該膠體金標記經過透析除鹽處理的抗伏馬毒素的單克隆抗體；

步驟四，將步驟三得到的單克隆抗體蛋白噴涂到金標墊上，將伏馬毒素-OVA偶聯物噴涂到T線，兔抗鼠的單克隆抗體噴涂到C線，組裝成試紙條，干燥；

步驟五，將待測樣品用甲醇提取，離心，取上清，將上清滴入試紙條的樣本槽中，獲取T線和C線的顯色，鑒定，得到結果。

2、根據權利要求1所述的用膠體金免疫層析試驗快速檢測伏馬毒素的方法，其特征是，步驟三中，所述膠體金的制備方法具體為：將100ml的0.005％HAuCl4溶液加熱至沸騰，之后加入0.5～1ml的1％檸檬酸三鈉水溶液，煮沸7～10min，最后加三蒸水至100ml，制備得到40nm的膠體金溶液；其中，百分數為重量體積百分數。

3、根據權利要求1所述的用膠體金免疫層析試驗快速檢測伏馬毒素的方法，其特征是，步驟三中，所述標記具體為：在攪拌的條件下，向膠體金溶液中加入單克隆抗體，使其終濃度達到40ug/mL，25℃下孵育5min，用0.1mol/L?K2CO3調節膠體金溶液的pH為9.0，然后加入10％BSA至BSA的終濃度為0.1％，10000rpm離心20min，棄上清，再用0.01mM?pH為9.0的Tris緩沖液恢復，重復1次，之后將沉淀重懸于原體積的1/10的0.01mM?pH為9.0的Tris緩沖液中，最后加入10％BSA至BSA的終濃度為0.1％，4℃儲存備用；其中，百分數為重量體積百分數。

4、根據權利要求1所述的用膠體金免疫層析試驗快速檢測伏馬毒素的方法，其特征是，步驟四中，所述干燥為37℃烘箱干燥。

5、根據權利要求1所述的用膠體金免疫層析試驗快速檢測伏馬毒素的方法，其特征是，步驟五中，所述甲醇為體積分數為80％的甲醇。

6、根據權利要求1所述的用膠體金免疫層析試驗快速檢測伏馬毒素的方法，其特征是，步驟五中，所述離心為2500g離心15分鐘。

7、根據權利要求1所述的用膠體金免疫層析試驗快速檢測伏馬毒素的方法，其特征是，步驟五中，所述鑒定具體為：在C線上出現棕紅色條帶，說明待測樣品中含伏馬毒素；在T線和C線上均出現棕紅色條帶，說明待測樣品中不含伏馬毒素。