[發明專利]水稻愈傷組織質量評價方法

無效

• 申請號: 200910272963.6
• 申請日: 2009-11-27
• 公開（公告）號: CN102081031A
• 公開（公告）日: 2011-06-01
• 發明（設計）人: 李陽;李陽生
• 申請（專利權）人: 武漢大學
• 主分類號: G01N15/02
• 分類號: G01N15/02;G01N21/00;G01N33/02
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 王敏鋒

技術領域

本發明涉及水稻質量評價技術領域，更具體涉及水稻愈傷組織質量評價方法。該方法適用于所有水稻。

背景技術

在水稻組織培養以及其他物種的組織培養研究過程中，我們要進行培養基對愈傷組織的生長率和生長質量進行評估，為培養基篩選和設計提供依據，對生長率進行評價很容易進行，只要計算愈傷繼代前后的重量比值即可，但是對愈傷質量進行評價就要有相應的模型，在此之前還沒有這種模型被建立。這就給培養基的綜合評估帶來了問題。所以本發明是建立了愈傷組織評價的模型，主要對愈傷組織質量相關的四個形狀進行評估、統計，將愈傷組織的質量進行量化，這樣就有利于對愈傷組織的質量進行量化評比，使得我們對培養基的研究更為嚴謹，方便。

發明內容

本發明的目的是在于提供了一種水稻愈傷組織質量評價方法，該方法首次建立了水稻愈傷組織的評價模型，評價結果和轉基因效率基本一致，模型的建立有利于實驗和生產的評估，比較和質量控制。本評價模型得分低于70以下愈傷組織質量較差，分化率不高，也很難進行轉基因操作；得分在70-90之間的愈傷組織已經適合分化，可以得到較高的分化率，仍得不到較高的轉化率，很難轉化成功，得分大于90的愈傷組織適合農桿菌轉化操作，也有最高的分化率。

為了實現上述的目的，本發明采用以下技術措施：

一種水稻愈傷組織質量評價方法，其步驟是：

1)、本評估系統以愈傷組織顆粒，愈傷組織色澤，愈傷組織是否水化，愈傷組織是否有分化趨勢共四個指標做為評價指標。

2)、顆粒指標(P)：愈傷組織顆粒根據愈傷組織生長的具體情況分為：1，顆粒散碎，硬度低；2，顆粒致密，硬度高。

3)、如步驟2)所描述顆粒散碎定義為：愈傷組織的直徑小于3mm，容易松散，不緊密，并且愈傷組織表面毛刺狀不平滑，切片特征為愈傷組織斷裂處較多，愈傷組織邊緣不清晰，切片觀察如圖.11。顆粒致密定義為：愈傷組織直徑大于3mm的顆粒，顆粒致密硬度高不宜松散，愈傷組織表面光滑狀，切片觀察為細胞致密，胞質密度高，愈傷組織邊緣清晰，愈傷組織組織的外層細胞結構明顯。

4)、愈傷組織色澤指標(C)：根據愈傷組織生長的具體情況分為五個等級，1，蒼白；2，黃白；3，黃；4，深黃；5，褐。如果一塊愈傷組織上有一點出現黑(褐)點，則這塊愈傷組織的整體色澤特征定義為”褐”，如果愈傷組織上有一點出現蒼白特征，這塊愈傷組織整體特征將定義為”蒼白”。愈傷組織具有蒼白特征則往往和水化特征相連，愈傷組織質地變軟，細胞死亡。

5)、如步驟4)所描述的5個顏色指標，以R，G，B顏色系統定義如下表：觀察光源為日光燈管，色溫：6500度，亮度500lux；

6)、愈傷組織水化(H)：1，愈傷組織水化：愈傷組織出現發白，發軟，慘白死亡的現象；切片特征為愈傷組織的表面層愈傷組織糜散，如圖.15：2，愈傷組織無水化：愈傷組織堅硬沒有出現水軟的現象。切片觀察可見愈傷組織表層細胞層清晰。有明顯的表層致密層結構，如圖.12。

7)、愈傷組織有分化趨勢(D)：1，愈傷組織有長出根狀分化的特征，切片觀察為愈傷組織表層愈傷組織的致密層變薄或消失，愈傷組織內部有跟源基發生，如圖.1，圖.16；2，愈傷組織正常無分化趨勢：切片觀察愈傷組織表層有明顯的致密層愈傷組織，愈傷組織內部細胞大小和結構較均勻，沒有明顯的區域結構。愈傷組織分化趨勢使得下一步的繼代開始容易褐化，而且有分化趨勢的愈傷組織轉基因沒有效率。侵染后很快死亡。

8)、顆粒指標(P)的權重系數Pc＝15；愈傷組織色澤(C)的權重系數Cc＝25；愈傷組織水化(H)的權重系數Hc＝40；愈傷組織分化趨勢(D)的權重系數Dc＝20；Pc+Cc+Hc+Dc＝100。

9)、顆粒系數(P)的狀態1，顆粒散碎的得分系數P1＝0；P2＝1。P1所占的比值P1p，P2所占的比值P2p；P1p+P2p＝1。

10)、愈傷組織色澤指標(C)的得分系數定義為：C1＝-1；C2＝0.75；C3＝1；C4＝0。75；C5＝-1。C1的比例分數C1p；C2的比例分數C2p；C3的比例分數C3p；C4的比例分數C4p；C5的比例分數C5p；C1p+C2p+C3p+C4p+C5p＝1。

11)、愈傷組織水化指標(H)的得分系數：H1＝-1；H2＝1。H1的比例分數H1p；H2的比例分數H2p；H1p+H2p＝1。

12)、愈傷組織分化指標(D)的得分系數：D1＝-1；D2＝1。D1的比例分數D1p；D2的比例分數D2p；D1p+D2p＝1。

13)、愈傷組織質量得分的計算方法是：