[發明專利]水稻愈傷組織質量評價方法

無效

• 申請號: 200910272963.6
• 申請日: 2009-11-27
• 公開（公告）號: CN102081031A
• 公開（公告）日: 2011-06-01
• 發明（設計）人: 李陽;李陽生
• 申請（專利權）人: 武漢大學
• 主分類號: G01N15/02
• 分類號: G01N15/02;G01N21/00;G01N33/02
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 王敏鋒

1.一種水稻愈傷組織質量評價方法，其步驟是：

1)、本評估系統以愈傷組織顆粒，愈傷組織色澤，愈傷組織是否水化，愈傷組織是否有分化趨勢共四個指標做為評價指標；

2)、顆粒指標(P)：愈傷組織顆粒根據愈傷組織生長的具體情況分為：a、顆粒散碎，硬度低；b、顆粒致密，硬度高；

3)、如步驟2)所描述顆粒散碎定義為：愈傷組織的直徑小于3mm，容易松散，不緊密，并且愈傷組織表面毛刺狀不平滑，切片為愈傷組織斷裂處多，愈傷組織邊緣不清晰，切片觀察，顆粒致密定義為：愈傷組織直徑大于3mm的顆粒，顆粒致密硬度高，愈傷組織表面光滑狀，切片觀察為細胞致密，胞質密度高，愈傷組織邊緣清晰，愈傷組織組織的頂層細胞結構明顯；

4)、愈傷組織色澤指標(C)：根據愈傷組織生長的具體情況分為五個等級，a、蒼白；b、黃白；c、黃；d、深黃；e、褐，一塊愈傷組織上出現黑點，這塊愈傷組織的整體色澤特征定義為褐，愈傷組織上有出現蒼白特征，這塊愈傷組織整體特征將定義為蒼白，愈傷組織有蒼白特征則往往和水化特征相連，愈傷組織質地變軟，細胞死亡；

5)、如步驟4)所描述的5個顏色指標，以R，G，B顏色系統定義如下表：觀察光源為日光燈管，色溫：6500度，亮度500lux；

6)、愈傷組織水化(H)：a、愈傷組織水化：愈傷組織出現發白，發軟，慘白死亡的現象；切片特征為愈傷組織的表面層愈傷組織糜散；b、愈傷組織無水化：愈傷組織堅硬沒有出現水軟的現象，切片觀察可見愈傷組織表層細胞層清晰，有明顯的表層致密層結構；

7)、愈傷組織有分化趨勢(D)：a、愈傷組織有長出根狀分化的特征，切片觀察為愈傷組織表層愈傷組織的致密層變薄或消失，愈傷組織內部有跟源基發生；b、愈傷組織正常無分化趨勢：切片觀察愈傷組織表層有明顯的致密層愈傷組織，愈傷組織內部細胞大小和結構均勻，沒有明顯的區域結構，愈傷組織分化趨勢使得下一步的繼代開始容易褐化，有分化趨勢的愈傷組織轉基因沒有效率，侵染后很快死亡；

8)、顆粒指標(P)的權重系數Pc＝15；愈傷組織色澤(C)的權重系數Cc＝25；愈傷組織水化(H)的權重系數Hc＝40；愈傷組織分化趨勢(D)的權重系數Dc＝20；Pc+Cc+Hc+Dc＝100；

9)、顆粒系數(P)的狀態，顆粒散碎的得分系數P1＝0；顆粒致密的得分系數P2＝1，散碎顆粒所占的比值P1p，致密顆粒所占的比值P2p；P1p+P2p＝1；

10)、愈傷組織色澤指標(C)的得分系數定義為：C1＝-1；C2＝0.75；C3＝1；C4＝0，75；C5＝-1；C1到C5分別代表蒼白，黃白，黃，深黃，褐五種狀態的得分系數，這5種狀態所占的比例分別定義為：C1p，C2p，C3p，C4p，C5p。C?1p+C2p+C3p+C4p+C5p＝1；

11)、愈傷組織水化指標(H)的得分系數：H1＝-1；H2＝1，H1為水化愈傷組織的得分系數，H2為未水化愈傷組織的得分系數。這兩種狀態的愈傷組織所占比例分別定義為H1p，H2p；H1p+H2p＝1；

12)、愈傷組織分化指標(D)的得分系數：D1＝-1；D2＝1，D1為有分化趨勢的愈傷組織的得分系數，H2為未出現分化趨勢的愈傷組織的得分系數，這兩種狀態的愈傷組織所占比例分別定義為：D1p，D2p。D1p+D2p＝1；

13)、愈傷組織質量得分的計算：

CS＝(P1*P1p+P2*P2p)*Pc+(C1*C1p+C2*C2p+C3*C3p+C4*C4p+C5*C5p)*Cc+(H1*H1p+H2*H2p)*Hc+(D1*D1p+D2*D2p)*Dc；

14)步驟13)描述的CS值低于70以下愈傷組織質量較差，分化率不高，很難進行轉基因操作；得分在70-90之間的愈傷組織已經適合分化，得到高的分化率，得不到高的轉化率，很難轉化成功，得分90分以上的愈傷組織適合農桿菌轉化操作，也有最高的分化率。